診斷探針

診斷探針，每種診斷探針都有不同的用處及區別點，共同點都是醫用品。ALL多探針診斷系統，腸道腺病毒41型診斷探針，套用cDNA文庫法製備HCV-1診斷晶片探針，特異性探針，高靈敏高準確SARS快速診斷螢光探針等不同產品的使用與方法。

基本介紹

• 中文名：診斷探針
• 套用：醫用品
• 公司：Cytocell公司
• 國家：英國

探針診斷系統

診斷探針英國Cytocell公司生產的ALL多探針診斷系統，專門為急性淋巴細胞白血病ALL設計的，在一張玻片上同時使用 8種不同的FISH探針，從而可以做到做一次雜交試驗而儘可能多地提供病人的基因型信息。

診斷探針

探針類型

探針1：MYC

8p 染色體的MYC 致癌基因的易位有許多斷裂點，但為了能分別阻斷而不管易位的存在，多探針診斷系統提供的探針組分別探測的區域很大(717Kb)。最接近的探針(177Kb)是332Kb 3'基因，標記為紅色。而最遠端的探針(188Kb)是380Kb 5'基因，標記為綠色。正常病人顯示為融合或紅綠信號密集地並排(2Y)，同時，基因的重排檢測為分開的綠色和紅色信號(1Y,1G,1R)。和分離細胞一樣，這個探針組可在間期細胞中檢測 MYC的重排。

探針2：P16

9p2 染色體缺失牽涉多種腫瘤，包括大約 10%的P16 缺失的兒科 ALL 病人。為了診斷這些缺失，ALL 多探針檢測系統含一支這樣的探針：標記為紅色，覆蓋區域為 9p21 101Kb區域，從P16 3' 59Kb延伸到 P15的 5'端。探針組還包含一支9號染色體質控探針（D9Z3，9q12上異染色質的阻斷），標記為綠色。正常細胞中，探針和質控在兩者的同系物會顯示有2個紅色和2個綠色信號(2R，2G)。檢測細胞會顯示：1個紅色信號和2個綠色質控(1R，2G)，表明如果缺失為半合子，P16從1條染色體中丟失；或者是沒有紅色信號和兩個綠色信號（0R，2G），表明是純合子缺失。

探針3：E2A/MLL

E2A 的重排在 ALL病例中相對普通，有兩種類型（t (1:19) 和 t (17;19)），占病人數量的 6%。經由 FISH檢測到 E2A相關的t(1:19)融合，用標準的細胞遺傳學檢測存在20-25%患者遺漏。兩個分裂探針由1支綠色的 3’探針1支紅色的 5’探針構成，基因的缺失將導致黃色或接近的紅/綠的信號發生分離，變成單獨的紅色和綠色。 因而，1個正常的細胞有兩個融合信號（黃色）。如果 E2A基因因為易位而重排，一支黃色分裂探針分裂成紅色和綠色，分別代表重排基因和染色體配偶體。這些病人的信號是3Y、1R、1G。

探針4：TEL/AML1

這種重排在兒童期B-ALL病例中最普通，使用FISH技術檢測到大約21%病例中都有。Cytocell的FISH探針是雙色雙融合探針，陽性細胞有兩個黃色信號。 ETV6 (TEL)探針包含一支含ETV6 5’終點的探針和一支覆蓋基因3’區的探針，都標記為紅色。對於AML，兩支探針都標記為綠色，一支位於RUNX1 3'，另一支在基因的5'末端。t(12:21)的病人，除了相應的12和21號正常染色體的紅色和綠色信號，會有兩個（黃色）融合信號(1R，1G，2Y)。有ETV6有大量缺失的地方，t(12;21)缺失的信號是1R、2G；或者是，存在t(12;21)重排的信號是1Y、1G。

探針5：M LL

在染色體區帶11q23的MLL基因的重排，可以在大約 85%的患B-ALL的嬰兒中發現。這支分裂探針由一支綠色5’探針和一支紅色3’探針組成，所以基因的破裂會形成1個黃色或緊密相連的紅色/綠色信號分裂成獨立的紅色和綠色信號。在正常的細胞中，會有2個融合信號（黃色）。如果MLL基因因為易位而重排，一支黃色分裂探針分裂成紅色和綠色，分別代表重排基因和染色體配偶體。這些病人的信號是1Y,1R,1G。

探針6：BCR/ABL

典型的立體易位t(9;22)在CML中最普遍，但在大約25% 的成人ALL和2-10% 的小兒ALL也有。BCR基因中有兩個斷裂點簇，較小和較大的斷裂簇分別為mBCR和MBCR。ALL幾乎大部分是由於斷裂點引起的，包括mBCR。在少量的ALL病例中，因為與其它染色體的相互作用，易位不會導致細胞遺傳學可見的Philadelphia染色體。在這些病例中，FISH對於突出融合基因很重要。 診斷系統中的BCR探針是雙融合探針，包含兩支BCR 探針，一支標測 BCR 3'，第二支覆蓋了基因5'56Kb的區域。兩支都標記為紅色並定位，所以斷裂點在mBCR或者MBCR都可以導致融合信號。ABL探針毗鄰群從FUB3 基因中部到離ABL 5'終點64Kb的位點，覆蓋了349Kb。 在正常細胞中，這些探針顯示紅色和綠色信號，對應各自的同系物（結果形成了2G 2R的構象)。t(9:22)病人，會有兩個融合信號（黃色），加上對應的22號和 9號正常染色體的紅色和綠色信號（1R 1G 2Y）。

探針7：IGH

t(8:14)易位最顯著的結果涉及到MYC原癌基因的重排。然而，在T-ALL中最常見到是IgH基因的非普遍性重排，在B-ALL中也可見到。IGH 基因內所有這些重排有斷裂點，Cytocell的 ALL多探針診斷系統中有一支IGH分裂探針，可以檢測到一些重排，包括固定和變異段之間區域的 IGH基因分裂，從而鑑別基因中比較少見的重排的IGH易位配偶體染色體。 正常細胞會有2個融合信號（黃色）。IGH上有重排，其中一個黃色信號會分裂成紅色或黃色（1Y,1R,1G）。

探針檢測系統

診斷探針產品名稱：診斷探針檢測系統發明人：K·塞托;J·-H·李;L·布萊爾

診斷探針

地址：美國加利福尼亞州

概述：本診斷探針檢測系統，發明涉及一種檢測核酸序列是否存在的方法，所用診斷探針包括基本上分別互補於靶標核酸鏈的第一和第二靶標區的第一和第二探針區，其中第一探針區位於第二探針區的5’端。第一探針區基本上互補於靶標核酸鏈的第一靶標區，靶標核酸鏈還具有第二靶標區，其中當靶標核酸鏈上的所述第一靶標區與第二靶標區連續時，那么在診斷探針上的第一和第二探針區用核酸間隔區隔開。

要害點步驟

一種檢測樣品核酸鏈中靶標核酸序列存在的方法，包括如下步驟：在雜交條件下，將被懷疑包含靶標核酸序列的樣品與診斷探針進行接觸；其中所述診斷探針的核苷酸序列包含(1)位於診斷探針5’端的第一探針區，基本上互補於所述靶標核酸序列的特徵性第一靶標區，和(2)位於所述第一探針區3’側的第二探針區，所述第二探針區基本上互補於靶標核酸鏈的靶標核酸序列的特徵性第二靶標區，其中當靶標核酸鏈上的所述第一靶標區與第二靶標區連續時，那么診斷探針上的第一和第二探針區由核酸間隔區所隔開，當診斷探針上的第一和第二探針區連續時，則靶標核酸鏈上的第一和第二靶標區之間存在著間插序列；由此在所選擇的雜交條件下，當第一探針區基本上互補於第一靶標區並且第二探針區基本上互補於第二靶標區時，第一和第二探針區能夠使診斷探針與靶標核酸鏈穩定雜交，形成可檢測的探針：靶標雜交體；但在所選擇的雜交條件下，當第一探針區不基本上互補於第一靶標區或第二探針區不基本上互補於第二靶標區時，診斷探針不能夠與靶標核酸鏈穩定雜交，不能形成在指示穩定雜交的閾值之上的可檢測的探針：靶標雜交體；和檢測穩定的探針：靶標雜交體的存在或不存在，作為樣品中的是否存在靶標核酸序列的指標。

腸道腺病毒41型診斷探針

腸道腺病毒41型診斷探針載體PACZ9201的構建武漢同濟醫科大學基礎醫學院病毒室430030張衛東，陳秀珠腸道腺病毒已證實為嬰幼兒病毒性腹瀉的主要病原體之一，僅次於輪狀病毒而排在第二位。由於這類病毒難以培養，糞便中病毒含量又很少，不能用常規細胞分離培養、ELISA以及限制性核酸內切酶等方法來檢測鑑定其病原體。因而需要找到一種靈敏度高、快速、簡捷而且一次能同時檢測大批量樣本的診斷方法。

診斷晶片探針

診斷探針目的

探討利用cDNA文庫法製備C型肝炎(HCV-1)診斷基因晶片探針的可行性。方法：用限制性內切酶Sau3AI消化HCV1a及1b全長cDNA，所得的酶切片段72℃補平加A，AT克隆，PCR初步鑑定，並測序。結果 HCV兩個亞型1a、1b的全長cDNA得到57個大小相對一致(200-1000bp)的片段，平均每個亞型約28個，PCR及序列分析表明，所擴增的片段均屬於HCV-1的特異基因，可做為HCV-1診斷基因晶片探針。結論 利用cDNA文庫法收集片段是一種快速、簡便製備晶片探針的實用方法。

使用

同血清型與基因型的基因晶片檢測方法，設計針對O型8個基因型、A型3個基因型和亞洲1型的特異性探針。從美國GenBank與英國世界口蹄疫參考實驗室基因庫下載了O型、A型和亞洲1型FMDV的VP1基因序列547條。對每一血清型序列用DNA Star軟體ClastalW程式進行多重比對，做系統發育分析並進行基因分型。用生物學軟體BioSun 2.0建立基因型資料庫，設計每一基因型的特異性探針。共設計出104條候選探針，通過晶片試驗篩選出12條特異性探針。以各型特異性探針所對應的靶序列模板做10倍系列稀釋進行PCR擴增，擴增產物與探針雜交，驗證各探針的靈敏度。對O型SEA、Euro-SA、ME-SA、WA 4個基因型的各條探針的靈敏度進行了檢驗，結果這些探針能夠檢測到102數量級拷貝數的陽性靶標。

診斷螢光探針

高靈敏高準確SARS快速診斷螢光探針

診斷探針DNA（RNA）診斷特別實時螢光定量PCR，是診斷SARS的主要方法。PCR可以檢測出在各種樣本（血液、糞便、唾液、呼吸道分泌物、組織切片）中的SARS病毒的遺傳物質。實時螢光定量PCR，具有靈敏度極高，特異性更強的特點，可檢測到低至單個拷貝的病毒基因。這意味著可以在病毒侵入人體早期進行檢測，可以實現對可疑病人和高危人群大量快速篩查，評價藥物療效和治癒指標有重要的參考價值。

技術指標

申請了兩項國家發明專利。①其中用於DNA晶片檢測、螢光PCR和蛋白質標記的菁類螢光探針，改進了現有國際上螢光探針的光穩定性（提高光穩定性近3倍），為大大改善螢光檢測準確可行度提供了條件； ②研究出性能優異、螢光干擾低的近紅外（波長635-750 nm）螢光探針，克服了常規紫外及低波長可見光的螢光背景干擾，使靈敏度大大提高，在中科院大連化物所蛋白分析組的套用顯示，在HPLC上的雷射誘導檢測極限。

診斷探針