血流感染病原微生物非培養快速診斷方法的研究

《血流感染病原微生物非培養快速診斷方法的研究》是依託西安交通大學，由答嶸擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：血流感染病原微生物非培養快速診斷方法的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：答嶸
• 依託單位：西安交通大學

項目摘要

快速檢測、鑑定和藥敏譜分析對於成功救治血流感染患者至關重要。傳統培養鑑定方法雖為金標準，但存在檢測結果滯後、生長緩慢菌和苛養菌敏感性差、受抗生素使用影響大等缺點，臨床迫切需要研發快速、敏感、不受抗生素影響的快速診斷方法。本研究擬採用革蘭染色特異探針螢光實時定量PCR技術直接從血液或無菌部位體腔液中擴增病原微生物的基因，並進行病原體載量檢測，將擴增產物進一步與分別點樣針對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌或真菌特異性探針的基因晶片進行核酸雜交，檢測雜交信號判讀鑑定病原微生物，從而達到快速診斷血流感染病原體的目的。同時，將本技術套用於臨床標本，與傳統血培養方法同步檢測，綜合分析其敏感性、特異性與檢測周期，評價該方法在臨床的套用前景。本研究不僅為血流感染病原學的快速診斷奠定了理論基礎，而且為自主研發快速診斷試劑盒提供了技術平台，同時對血流感染的診治具有重要意義，對臨床微生物檢驗的發展具有巨大的推動作用。

結題摘要

快速檢測、鑑定和藥敏譜分析對於成功救治血流感染患者至關重要。傳統培養鑑定方法雖為金標準，但存在檢測結果滯後、生長緩慢菌和苛養菌敏感性差、受抗生素使用影響大等缺點，臨床迫切需要研發快速、敏感、不受抗生素影響的快速診斷方法。本研究採用螢光實時定量PCR技術直接從血液或無菌部位體腔液中擴增血流感染臨床常見分離病原微生物的基因，並進行病原體載量檢測，將擴增產物進一步利用焦磷酸測序技術進行測序，鑑定病原微生物，從而達到快速診斷血流感染病原體的目的。同時，將本技術套用於臨床標本，與傳統血培養方法同步檢測，綜合分析其敏感性、特異性與檢測周期，評價該方法在臨床的套用前景。本研究首先通過查閱文獻與國家法規，並對西安交通大學第一附屬醫院血培養標本進行分析，綜合上述數據確定本研究建立的快速鑑定方法目標微生物的種類。通過對這些病原微生物的基因利用Clustal X軟體進行多重序列比對，確定細菌檢測靶基因為16S rRNA，而真菌為ITS1區域。採用SYBR GreenⅠ實時定量PCR擴增技術進行靶基因的擴增，進行微生物載量的確定。繼而對擴增產物進一步利用焦磷酸測序技術進行測序，確定病原微生物的種類。通過對標準菌株與臨床菌株的鑑定，其具有較高的敏感性與特異性。並通過建立模擬菌血症標本模型，對本研究的快速診斷方法進行評價，具有較高的檢出率與準確度。同時對本研究的快速診斷方法與傳統方法進行比對，能夠明顯縮短鑑定時間。本研究不僅為血流感染病原學的快速診斷奠定了理論基礎，而且為自主研發快速診斷試劑盒提供了技術平台，同時對血流感染的診治具有重要意義，對臨床微生物檢驗的發展具有巨大的推動作用。