蜈蚣藥材的質量檢測方法

蜈蚣藥材的質量檢測方法

《蜈蚣藥材的質量檢測方法》是魯南製藥集團股份有限公司於2015年7月13日申請的專利,該專利的公布號為CN105004809B,授權公布日為2017年2月8日,發明人是張貴民、蘇瑞強、劉武占。

《蜈蚣藥材的質量檢測方法》公開了一種蜈蚣藥材的質量檢測方法,該方法以蜈蚣中3,8‑二羥基喹啉為指標成分,採用高效液相色譜法或薄層色譜法對蜈蚣藥材進行質量檢測。該發明技術方案首次將3,8‑二羥基喹啉作為蜈蚣藥材質量檢測的指標成分。該方法操作簡便,條件可控,專屬性強,穩定性和重現性好,可有效彌補中國藥典中蜈蚣藥材質量檢測方法的不足,具有很強的實用性。

2020年7月14日,《蜈蚣藥材的質量檢測方法》獲得第二十一屆中國專利獎優秀獎。

(概述圖為《蜈蚣藥材的質量檢測方法》摘要附圖)

基本介紹

  • 中文名:蜈蚣藥材的質量檢測方法
  • 申請人:魯南製藥集團股份有限公司
  • 申請日:2015年7月13日
  • 申請號:2015104081479
  • 公布號:CN105004809B
  • 公布日:2017年2月8日
  • 發明人:張貴民、蘇瑞強、劉武占
  • 地址:山東省臨沂市紅旗路209號
  • Int. Cl.:G01N30/02(2006.01)I、G01N30/90(2006.01)I
  • 類別:發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,

專利背景

蜈蚣為蜈蚣科動物少棘巨蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch的乾燥體。春、夏二季捕捉,用竹片插入頭尾,繃直,乾燥。具有熄風鎮痙,通絡止痛,攻毒散結之功效,用於肝風內動,痙攣抽搐,小兒驚風,中風口歪半身不遂,破傷風,風濕頑痹,偏正頭痛,瘡瘍,瘰癧,蛇蟲咬傷。
蜈蚣主要含組織胺樣物質及溶血性蛋白質,此外尚含胺基酸、脂肪酸、膽固醇及微量元素(苗明三.現代實用中藥質量控制技術[M].北京:人民衛生出版社,2000:1055)。《中國藥典》2010年版一部中蜈蚣的質量檢測項目僅有性狀、水分、總灰分、浸出物(國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2010年版一部.化學工業出版社,2010:335-336),缺乏專屬性強的薄層色譜鑑別或含量測定等質量檢測項目,使得蜈蚣藥材的質量難以得到有效地保證。
中國國內有報導對蜈蚣中胺基酸類成分(吳剛.少棘蜈蚣研究[J].生物化學雜誌,1992,24(11):650)和組織胺(鄧芳,方紅.蜈蚣藥材中毒性成分組織胺的含量測定[J].中草藥,1997,28(8):472)進行測定,胺基酸類成分及組織胺在多數動植物組織中廣泛存在,此類成分專屬性不強,難以有效檢測蜈蚣的質量。韓國學者從蜈蚣中分離得到喹啉類化合物3,8-二羥基喹啉,具有抗腫瘤活性(Surk-Sik Moon等.Jineol,a Cytotoxic Alkaloidfrom the Centipede Scolopendra subspinipes[J].Nat.Prod.1996,59:777-779),但未見以對蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉為指標成分建立測定方法的報導。該發明人從蜈蚣中分離得到了3,8-二羥基喹啉,其為黃綠色粉末,以此成分作為蜈蚣的指標成分,首次建立了蜈蚣藥材的質量檢測方法。

發明內容

專利目的

《蜈蚣藥材的質量檢測方法》的目的是提供一種蜈蚣藥材的質量檢測方法。該方法是以蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉為指標成分,採用高效液相色譜法檢測蜈蚣中指標性成分3,8-二羥基喹啉的重量百分比或用薄層色譜法鑑別蜈蚣中3,8-二羥基喹啉。

技術方案

《蜈蚣藥材的質量檢測方法》技術方案以高效液相色譜法測定蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉,包括下列步驟:
1)對照品溶液製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉對照品,用甲醇溶解,配製成對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末,精密稱定,加25倍量甲醇,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:進樣體積5微升;流速:0.6-1.0毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:35-50℃;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀溶液=28-36:72-64。
優選地,步驟1)所述3,8-二羥基喹啉對照品濃度為0.00362毫克/毫升。
優選地,步驟3)所述色譜條件為:進樣體積5微升;流速:0.6毫升/分鐘;檢測波長:252納米;柱溫:40℃;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀溶液=28:64。
《蜈蚣藥材的質量檢測方法》技術方案已薄層色譜法鑑別蜈蚣中3,8-二羥基喹啉,包括以下步驟:
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.1毫克/毫升-1.0毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末,精密稱定,加10倍量甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水溶散,用乙酸乙酯提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇溶解,作為供試品溶液;
3)點樣、展開:分別吸取對照品溶液、供試品溶液點於同一薄層板上,以氯仿:甲醇:甲酸=10:0.8-1.5:1為展開劑,展開,取出,晾乾,254納米紫外光燈下檢視。
優選地,步驟1)所述3,8-二羥基喹啉對照品溶液的濃度為為0.8毫克/毫升。
優選地,步驟3)所述展開劑最佳為三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.2:1。

改善效果

與2015年7月之前的技術比較,《蜈蚣藥材的質量檢測方法》蜈蚣藥材的質量檢測方法首次將3,8-二羥基喹啉作為蜈蚣藥材質量檢測的指標成分,採用高效液相色譜法和薄層色譜法對蜈蚣藥材進行質量檢測,操作簡便,條件可控,專屬性強,穩定性和重現性好,可有效彌補中國藥典中蜈蚣藥材質量檢測方法的不足,具有很強的實用性。該發明技術方案也可為中藥製劑中蜈蚣的質量檢測提供參考。

附圖說明

圖1是3,8-二羥基喹啉對照品的HPLC圖;
圖2是蜈蚣藥材的HPLC圖,其中峰1是3,8-二羥基喹啉;
圖3是不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖。

技術領域

《蜈蚣藥材的質量檢測方法》涉及一種蜈蚣藥材的質量檢測方法,屬於中藥領域。

權利要求

1.一種蜈蚣藥材的質量檢測方法,其特徵在於,該方法採用高效液相色譜法檢測蜈蚣中指標性成分3,8-二羥基喹啉的重量百分比或採用薄層色譜法鑑別蜈蚣中3,8-二羥基喹啉;
所述高效液相色譜法包括以下步驟:
1)對照品溶液製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉對照品,用甲醇溶解,配製成對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末,精密稱定,加25倍量甲醇,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:進樣體積5微升;流速:0.6-1.0毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:35-50℃;流動相:甲醇:10毫摩爾/升磷酸二氫鉀溶液=28-36:72-64;
所述薄層色譜法包括以下步驟:
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.1毫克/毫升-1.0毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末,精密稱定,加10倍量甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水溶散,用乙酸乙酯提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇溶解,作為供試品溶液;
3)點樣、展開:分別吸取對照品溶液、供試品溶液點於同一薄層板上,以氯仿:甲醇:甲酸=10:0.8-1.5:1為展開劑,展開,取出,晾乾,254納米紫外光燈下檢視。
2.根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,高效液相色譜法步驟1)所述3,8-二羥基喹啉對照品溶液的濃度為0.00362毫克/毫升。
3.根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,薄層色譜法步驟1)所述3,8-二羥基喹啉對照品溶液的濃度為0.8毫克/毫升。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法,其特徵在於,所述色譜條件為:進樣體積5微升;流速:0.6毫升/分鐘;檢測波長:252納米;柱溫:35℃;流動相:甲醇:10毫摩爾/升磷酸二氫鉀溶液=28:64。
5.根據權利要求1-3中任一項所述的方法,其特徵在於,展開劑為三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.2:1。
6.根據權利要求4所述的方法,其特徵在於,展開劑為三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.2:1。

實施方式

實施例1蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉,用甲醇溶解,配製成0.00362毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇25毫升,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6毫米×250毫米,5微米)流速:0.6毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:35℃;進樣體積5微升;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀=28:64。
4)標準曲線的繪製:精密吸取濃度為0.00362毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液1微升、2微升、4微升、8微升、10微升、12微升,按上述色譜條件測定的峰面積,以進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,得回歸方程Y=7774.301X-44.053,r=9994,線性範圍0.00362微克—0.04344微克。
5)精密度試驗:按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法,分別精密吸取同一對照品溶液5微升,連續進樣6次,按上述條件測定3,8-二羥基喹啉的峰面積,其RSD為0.657%。
6)穩定性試驗:按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法,精密吸取同一供試品溶液5微升,分別在0,2,4,6,8小時進樣,按上述色譜條件測定3,8-二羥基喹啉的峰面積,其RSD為0.785%。
7)重複性試驗:按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法,取蜈蚣6份,精密稱定,按照供試品溶液的製備方法製備供試品溶液,按上述色譜條件測定3,8-二羥基喹啉的含量,其RSD為0.536%。
8)回收率試驗:按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法,取6份已知含量的藥材粉末約0.5克,精密稱定,分別精密加入0.34毫克的3,8-二羥基喹啉,按照供試品溶液的製備方法製成加樣供試品溶液,按上述色譜條件測定含量,計算回收率,結果平均回收率為99.22%,RSD為0.373%。
實施例2蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉,用甲醇溶解,配製成0.00362毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇25毫升,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6毫米×250毫米,5微米)流速:0.8毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:40℃;進樣體積5微升;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀=32:68。
其他步驟同實施例1。
實施例3蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉,用甲醇溶解,配製成0.00362毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇25毫升,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6毫米×250毫米,5微米)流速:0.9毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:45℃;進樣體積5微升;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀=34:67。
其他步驟同實施例1。
實施例4蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:精密稱取3,8-二羥基喹啉,用甲醇溶解,配製成0.00362毫克/毫升的3,8-二羥基喹啉對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇25毫升,稱重,超聲處理30分鐘,取出,放冷,補重,搖勻,濾過,作為供試品溶液;
3)樣品的測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,注入液相色譜儀,測定,色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(4.6毫米×250毫米,5微米)流速:1.0毫升/分鐘;檢測波長252納米;柱溫:50℃;進樣體積5微升;流動相:甲醇-10毫摩爾/升磷酸二氫鉀=36:72。
其他步驟同實施例1。
實施例5蜈蚣中質量檢測方法
採用實施例1所述方法測定的不同批次的蜈蚣中3,8-二羥基喹啉的含量,結果見表1。
蜈蚣藥材的質量檢測方法
表1不同批次的蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉含量
結果3,8-二羥基喹啉的含量多在0.040%以上,僅有一批霉變的蜈蚣含量較低,表明以3,8-二羥基喹啉為指標可以檢測蜈蚣的質量,建立的HPLC法測定蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉切實可行。
實施例6蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.1毫克/毫升對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水10毫升溶散,用乙酸乙酯10毫升提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇1毫升使溶解,作為供試品溶液。
3)點樣、展開、檢視:分別吸取3,8-二羥基對照品溶液、供試品溶液5微升,點樣於同一矽膠GF254薄層板上,以三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:0.8:1為展開劑,展距8厘米,取出,晾乾,置254納米紫外光燈下檢視。
4)結果:圖3不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖,結果表明:不同批次的蜈蚣在與對照品色譜對應的位置上,顯相同顏色的斑點。色譜分離良好,蜈蚣的特徵斑點突出,建立的TLC方法可以作為蜈蚣的質量檢測方法。
實施例7蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.5毫克/毫升對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水10毫升溶散,用乙酸乙酯10毫升提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇1毫升使溶解,作為供試品溶液。
3)點樣、展開、檢視:分別吸取3,8-二羥基對照品溶液、供試品溶液5微升,點樣於同一矽膠GF254薄層板上,以三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1:1為展開劑,展距8厘米,取出,晾乾,置254納米紫外光燈下檢視。
4)結果:圖3不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖,結果表明:不同批次的蜈蚣在與對照品色譜對應的位置上,顯相同顏色的斑點。色譜分離良好,蜈蚣的特徵斑點突出,建立的TLC方法可以作為蜈蚣的質量檢測方法。
實施例8蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.8毫克/毫升對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水10毫升溶散,用乙酸乙酯10毫升提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇1毫升使溶解,作為供試品溶液。
3)點樣、展開、檢視:分別吸取3,8-二羥基對照品溶液、供試品溶液5微升,點樣於同一矽膠GF254薄層板上,以三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.2:1為展開劑,展距8厘米,取出,晾乾,置254納米紫外光燈下檢視。
4)結果:圖3不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖,結果表明:不同批次的蜈蚣在與對照品色譜對應的位置上,顯相同顏色的斑點。色譜分離良好,蜈蚣的特徵斑點突出,建立的TLC方法可以作為蜈蚣的質量檢測方法。
實施例9蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為0.9毫克/毫升對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水10毫升溶散,用乙酸乙酯10毫升提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇1毫升使溶解,作為供試品溶液。
3)點樣、展開、檢視:分別吸取3,8-二羥基對照品溶液、供試品溶液5微升,點樣於同一矽膠GF254薄層板上,以三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.4:1為展開劑,展距8厘米,取出,晾乾,置254納米紫外光燈下檢視。
4)結果:圖3不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖,結果表明:不同批次的蜈蚣在與對照品色譜對應的位置上,顯相同顏色的斑點。色譜分離良好,蜈蚣的特徵斑點突出,建立的TLC方法可以作為蜈蚣的質量檢測方法。
實施例10蜈蚣藥材質量檢測方法
1)對照品溶液的製備:取3,8-二羥基喹啉對照品適量,加甲醇溶解,配製成濃度為1.0毫克/毫升對照品溶液;
2)供試品溶液的製備:取蜈蚣藥材粉末1克,精密稱定,加甲醇,超聲處理30分鐘,取出,濾過,水浴蒸乾,殘渣加水10毫升溶散,用乙酸乙酯10毫升提取1次,分取乙酸乙酯層,水浴蒸乾,殘渣加甲醇1毫升使溶解,作為供試品溶液。
3)點樣、展開、檢視:分別吸取3,8-二羥基對照品溶液、供試品溶液5微升,點樣於同一矽膠GF254薄層板上,以三氯甲烷:甲醇:甲酸=10:1.5:1為展開劑,展距8厘米,取出,晾乾,置254納米紫外光燈下檢視。
4)結果:圖3不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖,結果表明:不同批次的蜈蚣在與對照品色譜對應的位置上,顯相同顏色的斑點。色譜分離良好,蜈蚣的特徵斑點突出,建立的TLC方法可以作為蜈蚣的質量檢測方法。

榮譽表彰

2020年7月14日,《蜈蚣藥材的質量檢測方法》獲得第二十一屆中國專利獎優秀獎。

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