《蛋白激酶D在血管生成與重構過程中的作用及分子機制》是依託北京大學，由歐陽昆富擔任負責人的重大研究計畫。
基本介紹
- 中文名：蛋白激酶D在血管生成與重構過程中的作用及分子機制
- 項目負責人：歐陽昆富
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：重大研究計畫
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛋白激酶D是最近二十年來才發現的一類絲氨酸/蘇氨酸激酶，在調控細胞增殖、分化、極性、囊泡轉運和分泌等方面有重要作用。PKD在哺乳動物中有三種不同的亞型，不同亞型之間存在功能共冗。體外實驗表明PKD可能調節內皮細胞的增殖、通透性與管狀結構形成，但PKD如何調控在體血管內皮細胞穩態、血管生成及血管重構的作用尚不清楚，PKD在內皮細胞中的特異性的磷酸化底物尚不清楚。為了解答這些問題，我們構建了所有三種PKD亞型的flox小鼠。我們發現內皮細胞特異性地PKD三敲除會導致胚胎致死，並伴隨著明顯的血管發育異常；我們進一步發現在培養的內皮細胞中PKD三敲除會降低VEGF刺激誘導的管狀結構的形成。在這些發現的基礎上，我們擬進一步確定PKD在小鼠胚胎血管發育中的作用與分子機制，研究PKD在內皮細胞中的磷酸化底物與分子調控網路，並探討PKD在成年小鼠腫瘤血管生成與血管損傷重構過程中的作用。
結題摘要
蛋白激酶D（PKD）是一類絲氨酸/蘇氨酸激酶，在調控細胞增殖、分化、極性、囊泡轉運和分泌等方面有重要作用。PKD在哺乳動物中有三種不同的亞型，不同亞型之間存在功能共冗。到目前為止，內皮細胞PKD在調節血管生成、血管功能與血管重構等方面的作用尚不十分清楚，對於PKD在內皮細胞中的磷酸化底物也不清楚。為了回答這些問題，我們引進了所有三種PKD亞型的flox小鼠及內皮細胞特異性的Tie2-Cre小鼠與可誘導的iPdgfb-Cre小鼠，並進一步建立了內皮細胞特異性的PKD三敲除小鼠。我們發現Tie2-Cre介導的、內皮細胞特異性的PKD三敲除會導致小鼠胚胎致死，並伴隨著明顯的血管與肝臟發育異常，主要表現為腹部血管密度下降、肝臟體積減小、肝臟靜脈竇內腔變大以及肝臟中內皮細胞與肝細胞凋亡增加；體外培養體系也證明了PKD基因敲除會減少VEGF誘導的管狀結構的形成以及eNOS活性的上升，但是不影響肝臟細胞與內皮細胞的生長，也不影響成年小鼠肝臟的再生過程；在新生小鼠內皮細胞中敲除所有三種PKD亞型會導致視網膜血管發育異常，主要表現為視網膜血管通透性增加、血管面積減少與密度增加；在成年小鼠血管內皮細胞中敲除PKD基因會降低ACh引起的血管舒張，但是不影響導絲拉傷與頸動脈結紮誘導的血管重構過程。我們的這些研究結果為進一步了解PKD在血管生理與病理過程中的作用提供了重要的依據。
