蛋白截斷實驗

蛋白截斷實驗(protein truncation test,PTT)或叫體外合成蛋白質測定(IVSP),它能檢測導致開放閱讀框架改變的鹼基缺失或插人突變等。先提取細胞mRNA,將待測靶基因逆轉錄為cDNA,所用逆轉錄引物含一段T7 啟動子和真核細胞翻譯起始序列,逆轉錄產物在無細胞提取液中翻譯為相應的蛋白質。

如果基因突變導致了開放閱讀框架的改變,那么台成的蛋白質經SDSPAGE分離時會出現比正常蛋白質或長或短的重白產物。本力法的優點是突變檢出率高,並可檢測4~5kb片段的突變;缺點是不能檢測不影響開放閱讀框架的突變,且需要抽提組織mRNA。

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