《葛根素上調BDNF治療血管性痴呆的機制研究》是依託西安交通大學，由吳海琴擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：葛根素上調BDNF治療血管性痴呆的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳海琴
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們研究發現葛根素對血管性痴呆具有治療作用，並上調BDNF的表達，還發現葛根素可以過調節細胞內鈣離子濃度，對缺血性腦損傷發揮保護作用。前人研究表明鈣依賴的MoCP2蛋白磷酸化是調控BDNF表達的關鍵因素，而BDNF主要通過PI3K-Akt通路發揮神經保護作用。由此我們提出假設：葛根素作用於細胞膜鈣離子通道，調節細胞內鈣離子濃度，誘導MeCP2磷酸化，促進MeCP2與BDNF基因啟動子解離，從而上調BDNF表達，最終BDNF與TrkB結合，通過PI3K-Akt通路發揮神經保護作用，改善血管性痴呆的預後。本研究擬在神經細胞及大鼠模型上套用膜片鉗、雷射共聚焦螢光顯像、分子生物學等實驗手段觀察葛根素干預前後痴呆指標和BDNF表達調控分子的變化，從細胞及活體動物兩個層面來驗證我們關於葛根素上調BDNF治療血管性痴呆的機制假設，期望完善相關機制，為葛根素套用於臨床治療血管性痴呆提供理論依據。
結題摘要
背景：血管性痴呆是導致痴呆的第2位主要原因，因此預防及治療VaD具有重要的經濟和社會價值。目的：證明葛根素通過調節神經細胞內Ca2+濃度，促進Ca2+依賴的鈣族蛋白磷酸化，上調BDNF表達，通過PI3K-AKT通路，對VaD發揮神經保護作用。實驗方法：在體實驗：採用改良的2-VO法製備VaD大鼠模型。Morris水迷宮檢測大鼠的學習記憶能力，HE染色顯微鏡下觀察海馬區結構。流式細胞儀檢測Ca2+濃度，免疫組化檢測BDNF、MeCP2及磷酸化MeCP2表達，免疫螢光染色檢測CaM、CaMKⅡ的陽性細胞數，ELISA法檢測cAMP的含量，Western blot檢測CaM、CaMKⅡ、BDNF、MeCP2及磷酸化MeCP2含量，RT-PCR檢測CaM、CaMKII mRNA的表達。細胞實驗：PC12細胞氧糖缺如建立血管性細胞模型。Western Blot檢測CaM、CaMKⅡ、MECP2、BDNF及Akt蛋白表達。實驗結果：在體實驗：模型組Ca2+濃度最高，對照組最低。CaM在對照組中表達最低，模型組中最多，葛根素干預組介於兩者之間。CaMKⅡ在模型組中表達與對照組相當，葛根素組明顯升高。MeCP2 表達各組間無差別，磷酸化MeCP2 、BDNF以及cAMP在對照組中表達最低，葛根素組中表達最多。模型組和葛根素組CaM、CaMKⅡ mRNA的表達均有不同程度降低，但葛根素組的表達較模型組明顯升高。細胞實驗：CaM模型組中表達最高，葛根素組與對照組表達基本相當。CaMKⅡ在模型組中表達量與對照組基本相當，而葛根素組中表達明顯升高。MeCP2在葛根素組中表達最高，模型組中表達量與對照組基本相當。BDNF在模型組表達量最低，葛根素干預組最高。P-AKT在對照組和痴呆模型組表達基本相當，在葛根素組中表達最多。結論：葛根素對VaD大鼠的神經保護作用，可能與減少急性期的CaM的釋放，增加CaMKⅡ、p-MeCP2表達，減輕海馬細胞鈣離子超載所致損傷，促進慢性期Ca2+內流，上調CaM、CaMKⅡ mRNA的表達密切相關，提高CaM、CaMKⅡ蛋白分子的表達，誘導腺苷酸環化酶及鳥苷酸環化酶磷酸化進程，增強cAMP及cGMP的活性，提高BDNF含量，激活下游PI3K-AKT通路有關
