濾紙纖維一般能吸附29~25%的水分，其中6~7%是以氫鍵與纖維素的羥基想結合，在通常條件下，不易除去，所以和水相混合的溶劑仍然形成兩相。在紙色譜法中，這種水分組成固定相，而纖維間空隙能通過流動相。
濾紙,展開劑,操作方法,
濾紙
濾紙一般選用中速濾紙，也可結合展開溶劑來考慮。以丁醇為主的溶劑系統黏度較大，展開速度慢；相反，石油醚、氯仿等為主的溶劑則展開速度較快。可據此結合實驗要求選擇快速、中速或慢速的濾紙。濾紙厚薄的選用，一般定性分析用較薄的濾紙，厚質濾紙則用於製備。當溶質為弱酸、弱鹼或兩性物質時,pH對色譜影響很大。這是因為當溶質成游離狀態或成鹽時，在兩相間的分配係數差別很大，因此pH應保持恆定。恆定pH的方法，一種是展開劑採用一定pH的緩衝液，另一種是將濾紙經緩衝液處理，用中性溶劑展開。
展開劑
展開劑可以是單一溶劑，也可以是混合溶劑。選用的溶劑系統應對被分離溶質有一定的溶解度，既不要使它們跑得太快（Rf=1），也不要使它們留在原點不動（Rf=0）。可取溶解度較大的溶劑與較小的溶劑按不同比例配製，有時還須加第三種溶劑，以調節系統的pH和使前兩種溶劑的互溶度增加。
操作方法
1、點樣
可用供熔點測定用的玻璃毛細管點樣。如需定量，則可利用市售的血球計數管，將頭磨尖，即可套用。必要時可用水銀校正讀數。試樣應點於距紙底邊約2cm的起點線上，每點間距2cm左右，點的大小一般為其直徑不超過0. 5cm，也可點成3—5mm橫的長條。
