《致耐受性Exosome聯合Treg細胞誘導移植免疫耐受及其機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李霄擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：致耐受性Exosome聯合Treg細胞誘導移植免疫耐受及其機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李霄
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
以未成熟樹突狀細胞（imDC）和CD4+CD25+Foxp3+ 調節性T細胞（Treg）為主的免疫調節策略是目前移植免疫的研究熱點。但前者保存時間短，體內易被激活成熟，而後者增殖活化又依賴前者調控，因而臨床套用受限。目前發現DC可分泌膜性微囊體-Exosome，其表面富含相關免疫分子，並內含DC所提呈的外源性抗原，且性質穩定，可長期保存。文獻報導和我們前期研究表明，供體imDC來源的Exosome（imDex）可延長鼠類心臟和小腸移植物的存活時間，但需聯合小劑量免疫抑制藥物才能誘導出理想的耐受狀態，且該效果與體內CD4+CD25+ T細胞比例有密切關係。為解決上述臨床套用受限及誘導耐受效果弱等問題，本課題擬在鼠類心臟和肝臟移植模型中，觀察供體imDex與Treg單獨及聯合套用誘導免疫耐受的效果，並以吲哚胺-2,3-雙加氧酶為核心，探討兩者相互作用及誘導耐受的機制，為防治免疫排斥提供新思路。
結題摘要
如何減少和避免肝移植術後免疫抑制劑的套用，是肝臟移植研究領域的重要方向。目前公認的具有免疫調控能力的細胞是未成熟樹突狀細胞（imDC），但其受限於保存時間短，體內易被激活成熟，因而治療性研究受到限制。前期研究中，課題組利用供體imDC來源的Exosome（imDex）在一定程度上延長小鼠心臟移植物的存活時間，但需聯合小劑量免疫抑制藥物才能誘導出理想的耐受狀態，且該保護效果與體內Treg 比例有密切關係。為解決上述臨床套用受限及誘導耐受效果弱等問題，我們以BN/F344大鼠為供體，Lewis大鼠為受體，構建了近交系大鼠異基因原位肝臟移植模型。利用超高速梯度離心法自供體骨髓來源的未成熟樹突狀細胞（imDCs）的培養上清中獲得供體imDex。電子顯微鏡和流式細胞術證實分選出的imDex很好的保持了imDC的表型，其保護移植肝臟的最佳作用劑量為20μg。而後利用兩步免疫磁珠分選技術分選受體脾臟來源CD4+CD25+ T細胞，並與供體抗原提呈細胞共培養，獲得供體抗原預刺激的Treg。體內外實驗表明，輸注供體抗原特異性Treg對移植物的保護作用顯著高於單純磁珠分選後的自然Treg（P＜0.05）。兩者聯合套用組的受體生存時間顯著優於對照組（P＜0.01），聯合套用組受體移植肝術後第10d和第40d免疫排斥反應輕微，體內T細胞增殖活性及其細胞因子分泌均減低。外源性輸注的Treg體內出現顯著增殖，並且在受體移植物、脾臟、外周血中均有分布。進一步體外實驗中發現imDex可以擴增Treg，而體內Treg的檢測表明，imDex聯合處理組Treg增殖顯著高於單純的外源性Treg處理組，驗證了體外的實驗結果。本項目的研究首次證實，聯合輸注供體來源imDex和供體抗原特異性Treg，可在大鼠同種異基因肝移植模型中誘導出穩定的免疫耐受狀態，顯著延長移植物和受體的存活時間。同時還發現imDex在受體體內外擴增Treg細胞可能是兩者聯合套用發揮協同效果的機制。本項目研究為移植術後套用致耐受Exosome 和Treg 細胞誘導移植免疫耐受的思路提供理論支持和實驗證據，並為臨床誘導移植免疫耐受提供了成功經驗和有潛在套用價值的方案。
