《自體腹膜間皮細胞構建復層人工尿道修復兔尿道缺損》是依託上海交通大學，由朱英堅擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：自體腹膜間皮細胞構建復層人工尿道修復兔尿道缺損
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：朱英堅
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
尿道下裂和各種原因引起的尿道狹窄是泌尿外科常見疾病，由於尿道本身組織有限，理想的修復組織或替代物的缺乏一直是長段尿道缺損修復的主要難題。組織工程技術的發展為尿道缺損的修復帶來了新的希望，但種子細胞來源問題一直是限制組織工程尿道研究與套用的主要瓶頸。腹膜間皮細胞(PMC)已被證實具有上皮及間葉細胞的雙重潛能，有望同時解決尿道上皮和平滑肌的細胞來源問題。然而，PMC能否同時向上皮和平滑肌定向誘導、構建複合尿道樣組織並修復尿道缺損國內外未見報導。我們前期研究初步證實，含PMC的移植物能成功修復尿道缺損，提示其有可能成為組織工程尿道的優良種子細胞。本研究擬在此基礎上，利用PMC的多潛能特性，探討套用單一種子細胞分別向上皮和平滑肌定向誘導後，與支架材料複合構建立體管狀尿道樣組織，並用於自體尿道修復重建的可行性，為這一新型種子細胞在組織工程尿道中的研究與套用提供實驗依據和技術參數。
結題摘要
組織工程技術的發展為長段尿道缺損的修復帶來了希望，但是種子細胞來源問題一直是限制組織工程尿道研究與套用的主要瓶頸。本項目組通過研究發現腹膜間皮細胞(PMC)具有取材方便，體外擴增能力強等特點，並可在體外合適的環境下誘導成平滑肌樣細胞；同時將腹膜間皮細胞接種於支架材料表面(包括PGA和膀胱脫細胞基質),腹膜間皮細胞可成功黏附於支架表面，細胞與支架相容性好，並可分泌大量細胞外基質；構建形成的組織工程類腹膜樣組織，可成功用於實驗動物兔管狀尿道缺損的修復治療，術後1個月顯示正常尿道組織和替代組織之間可見較明顯界限；術後6個月修復的尿道無明顯狹窄和尿道憩室形成，正常尿道組織和替代組織無明顯界限，管腔黏膜完整。同期，考慮到血管化在組織工程尿道替代研究中的重要作用，研究內容中增加了一些促進組織工程腹膜樣組織血管化的研究，探討了人臍靜脈內皮細胞（hUVECs）來源的微囊泡（MVs）促進大鼠腹膜間皮細胞（PMCs）增殖及促進組織工程腹膜樣組織血管化的作用，通過PMCs 與hUVECs 來源的MVs 體外共培養，了解PMCs的增殖情況；套用ELISA方法對上清液中的VEGF蛋白水平進行了檢測；套用RT-PCR方法檢測細胞中VEGF的表達；體內實驗方面，將PMCs種植在小腸黏膜下層（SIS）表面，分別用加入MVs 的培養基和單純培養基對細胞支架複合物體外培養1 周后植入裸鼠皮下，2 周后取出移植物，觀察微血管密度變化；結果顯示hUVECs來源的MVs可明顯促進PMCs 增殖；MVs 處理組中，PMCs和上清液中的VEGF 明顯增高；MVs 處理組中的移植物新生微血管密度明顯增高。考慮到幹細胞在組織工程研究和套用中的重要價值，我們還進行了人臍帶間充質幹細胞能否向尿路上皮樣細胞分化的研究，採用尿路上皮細胞的條件培養液（UC-CM）加表皮生長因子（EGF）進行細胞體外誘導，誘導14天后幹細胞可表達人UPII 和cytokeratin18，提示在合適的體外環境條件下人臍帶間充質幹細胞具有向尿路上皮細胞分化的潛能,為尿道組織工程研究提供了一種新的可供選擇的種子細胞。
