自噬在TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡中的作用及機制研究

《自噬在TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡中的作用及機制研究》是依託中南大學，由李姝擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：自噬在TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡中的作用及機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：李姝
• 依託單位：中南大學

項目摘要

TNF-α誘導的RA-FLS腫瘤樣異常增殖和凋亡障礙是RA的主要病理特點，但其調控增殖和凋亡的機制尚不完全清楚。近期我們研究發現TNF-α能誘導RA-FLS發生自噬和凋亡。抑制自噬可促進TNF-α誘導的RA-FLS凋亡，阻抑RA-FLS增殖，提示自噬可能參與調控TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡。進一步實驗發現TNF-α可誘導PI3K/Akt信號通路活化，改變RA-FLS的細胞周期，但自噬調控TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡的機制尚不明確。本項目擬在此基礎上，通過藥物和siRNA上調或下調細胞自噬，套用雷射共聚焦顯微鏡、掃描電鏡、免疫印跡、流式細胞術等方法，深入研究自噬在TNF-α誘導的RA-FLS增殖和凋亡中的作用，探討PI3K/Akt等信號通路介導自噬調控RA-FLS增殖和凋亡的分子機制，從而為RA發病機制提供重要的實驗數據和新的理論基礎，為RA的治療提供新的干預靶點和策略。

結題摘要

自噬參與許多疾病的發病，但自噬在類風濕關節炎中的作用及其可能分子機制目前並不完全清楚。我們的研究旨在探討自噬是能否通過PI3K/AKT 信號通路調控類風濕關節炎滑膜細胞的增殖和凋亡。在體內研究中，我們構建了CIA模型鼠，我們觀察了大鼠的一般情況、關節腫脹情況、滑膜組織的炎症反應、細胞增殖和凋亡等情況。另外，在體外研究中，我們培養原代的類風濕關節炎滑膜成纖維細胞（RA-FLS），提前用PI3K抑制劑LY 294002抑制PI3K/AKT 信號通路，然後使RA-FLS暴露於TNF-α，觀察細胞增殖、凋亡、細胞因子分泌。細胞周期的情況，並檢測檢測相關蛋白。我們研究發現自噬的抑制劑氯喹（Chloroquine,CQ）和3-Methyladenine (3-MA)能減輕CIA模型鼠關節的腫脹程度，減輕滑膜組織的炎症反應、滑膜細胞的增殖，同時促進滑膜細胞的凋亡。同時體外實驗也發現自噬的抑制劑CQ和3-MA能抑制TNF-α誘導的滑膜成纖維細胞的增殖，並阻斷細胞停頓在 G2/M期，減少S 期的細胞數。更重要的是我們還發現提前用LY 294002抑制 PI3K/AKT 信號通路能部分逆轉TNF-α誘導的自噬和細胞因子分泌。我們的研究結果提示自噬抑制劑可通過調控PI3K/AKT信號通路減輕類風濕關節炎的炎症反應，抑制類風濕關節炎滑膜成纖維細胞的增殖，促進其凋亡。此項研究對揭示RA新的發病機制有重要意義，並為日後RA治療提供了新的靶點和理論基礎。