《自噬在強直性脊柱炎患者TNF-α介導骨溶解中的調節作用》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由馮媛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：自噬在強直性脊柱炎患者TNF-α介導骨溶解中的調節作用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：馮媛
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
骨、軟骨的破壞及局部骨質疏鬆是強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）的主要病理改變之一，破骨細胞在以上病理過程中發揮著非常重要的作用，同時TNF-α被證實可促進破骨細胞的分化，但其具體機制尚未完全闡明。近期研究顯示，TNF-α對多種細胞的自噬具有調節作用，而自噬蛋白可通過調控破骨細胞從而促進骨溶解而導致骨質疏鬆。同時我們前期研究發現，活動期AS患者的TNF-α與骨代謝產物、破骨細胞的自噬相關分子的表達量成正相關。以上結果提示TNF-α通過上調破骨細胞的自噬而促進了AS患者的骨破壞作用。本研究擬在前期研究基礎上，進一步明確AS患者破骨細胞的自噬相關分子表達情況，利用細胞、動物模型了解自噬在TNF-α介導骨溶解過程中的作用，證明在AS患者中存在著TNF-α依賴的自噬活化，並促進了破骨細胞的分化，從而明確自噬在AS患者TNF-α介導骨溶解過程中的關鍵作用。
結題摘要
研究意義：骨、軟骨的破壞及局部骨質疏鬆是強直性脊柱炎（AS）的主要病理改變之一，破骨細胞在以上病理過程中發揮著非常重要的作用，同時TNF-α被證實可促進破骨細胞的分化，但其具體機制尚未完全闡明。 研究方法：1. 檢測infliximab治療、未治療AS患者及OA（osteoarthritis）患者滑膜組織中TNF-α表達量、破骨細胞數，並用檢測Atg7、Beclin1等自噬相關分子，比較兩組患者破骨細胞數量及破骨細胞中上述自噬相關分子的表達差異。2.對HLA-B27轉基因小鼠進行抗TNF-α治療，ELISA法檢測小鼠血清TNF-α濃度， TRAP染色鑑定破骨細胞數量；免疫螢光法檢測Atg7、Beclin1等自噬相關分子含量。3.慢病毒轉染、藥物等方法干擾小鼠的BMCs的自噬相關分子表達情況，TNF-α誘導分化轉染組及對照組，TRAP染色後觀察各組破骨細胞形態及數量差異，並檢測破骨細胞相關基因NFATc1、OSCAR、TRAP的表達變化。 4.分離AS和健康人單核細胞並使用M-CSF、RANKL誘導破骨細胞分化，分別用TNF-α、bafilomycinA1（自噬抑制劑）進行干預，並檢測Atg7、Beclin1等自噬相關分子，使用圖像分析系統比較兩組患者破骨細胞數量及破骨細胞中上述自噬相關分子的表達差異。 研究結果：1. AS患者的TNF-α、自噬相關分子表達均較對照組顯著升高，破骨細胞分化率也較正常人升高。經anti-TNF-α治療後臨床指標、TNF-α、破骨相關、自噬相關分子表達均顯著減低。2. 經anti-TNF-α拮抗劑治療後轉基因鼠的的血清TNF-α濃度較前減低，且骶髂關節的炎症較前減輕，破骨細胞數量減少，Atg7、Beclin1表達減少。3. TNF-α可增強野生型小鼠的自噬分子表達，促進破骨細胞的分化；自噬抑制後破骨細胞分化較前減弱，TNF-α干預對破骨細胞的影響消失；4. TNF-α可促進AS患者破骨細胞的分化。進行自噬抑制後，破骨細胞分化能力減弱，且再進行TNF-α干預時分化能力無明顯變化。 結論：本研究證明了TNF-α通過上調AS患者自噬相關分子的表達而促進破骨細胞的分化，進而達到增強其關節骨溶解的病理作用，參與了AS的發病。為探尋AS的發生髮展尋找新的探索途徑，為解讀自身免疫性疾病的發病機制提供了新的線索。
