《膽囊癌細胞亞群的克隆分選及異質性分析》是依託上海交通大學，由劉穎斌擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：膽囊癌細胞亞群的克隆分選及異質性分析
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉穎斌
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腫瘤幹細胞在腫瘤復發、轉移中有重要作用；本項目組已在國家自然科學基金資助下分離出具有高轉移潛能的膽囊癌細胞亞群，發現高轉移潛能細胞亞群不同於其他細胞亞群的生物學與遺傳學特徵；推測在高轉移潛能的膽囊癌細胞亞群中可能存在腫瘤幹細胞的富集，因此表現為較高的轉移傾向。本研究擬對膽囊癌高轉移亞群GBC-SD/M3經過克隆分選和SP分選獲得4種克隆集落，採用RayBiotech抗體晶片檢測克隆集落的蛋白表達譜特性。基因晶片檢測結合生物信息學數據分析克隆集落之間的細胞因子表達，選擇出相關的重要的分子組群共性部分。FACS分選獲得細胞群，並經體內外實驗鑑定其具有腫瘤幹細胞的特性。通過分析克隆集落表面分子標誌物組群的共性分子，可以選擇確立膽囊癌幹細胞樣細胞的特異表面標誌物。研究結果將有利於闡述不同克隆集落轉移過程中功能基因組表達模式的變化規律，深入理解轉移本質，為膽囊癌的分子靶向治療提供理論依據和實驗基礎。
結題摘要
膽囊癌惡性程度高，預後差，是一種嚴重威脅人民民眾身體健康的疾病。導致膽囊癌預後差的主要原因是因為膽囊癌術後經常出現的復發轉移現象，因此深入研究膽囊癌的復發轉移機制，對於最終攻克膽囊癌，提高膽囊癌病人的預後具有重要的臨床意義。為了研究膽囊癌細胞內的轉移機制，我們通過體外轉移小室實驗篩選到了具有高轉移潛能的膽囊癌細胞株GBC-SD-I-2 和SGC-996-MI-2 細胞。並通過體外的MTT 實驗，克隆形成實驗，轉移實驗和侵襲實驗，驗證了高轉移潛能膽囊癌細胞株GBC-SD-I-2 和 SGC-996-MI-2 相對於其母本細胞GBC-SD 與 SGC-996 具有不同的生物學特性。Western 實驗發現，在高轉移潛能細胞株中，腫瘤幹細胞的marker CD133 的表達明顯增高，提示在高轉移潛能膽囊癌細胞株中，腫瘤幹細胞的比例明顯提高，這可能是導致膽囊癌病人術後發生復發轉移的主要原因之一。隨後，我們通過生物晶片，檢測了在高轉移潛能膽囊癌細胞株及其母本細胞中，基因表達的差異，獲得了在不同轉移潛能細胞中表達具有顯著差異的候選分子群。從這些差異基因中，我們發現NLK/ZFX/HMGB1等分子在高轉移潛能膽囊癌細胞株中表達顯著上升。功能學實驗也顯示細胞內敲減NLK 和ZFX 後，細胞的轉移能力受到抑制。如果用丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate，EP，一種HMGB1的抑制劑）抑制HMGB1信號通路，同樣可以抑制膽囊癌細胞的轉移，並誘導細胞發生凋亡。上述結果提示，在細胞內敲減NLK/ZFX分子或者抑制HMGB1，可以作為抑制膽囊癌轉移的潛在分子靶點。由於膽囊癌在早期沒有明顯的症狀，很多患者被確診時已經無法進行根治性切除。因此，如何治療晚期膽囊癌病人，是一個重要的研究課題。祖國的中醫藥寶庫為我們提供了取之不竭的藥物資源。我們建立了體外的藥物篩選平台，通過此實驗平台，我們發現Wogonin可以增加maspin 基因表達水平並進而抑制膽囊癌細胞的運動能力和侵襲轉移能力。在此藥物篩選平台基礎上，我們還發現，cirsimaritin和matrine對膽囊癌細胞有顯著地誘導凋亡的作用，並闡明了介導這一功能的分子機制。通過以上這些研究結果，加深了我們對於膽囊癌細胞轉移過程的認識，為我們針對膽囊癌的侵襲轉移過程設計特異性的靶向藥物提供了有效的分子靶點，同時闡明了中藥有效成分抑制膽囊癌轉移的
