《膠質瘤中miR-93的轉錄調控及其促細胞周期進展的新機制》是依託天津醫科大學，由張安玲擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：膠質瘤中miR-93的轉錄調控及其促細胞周期進展的新機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張安玲
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
膠質瘤是神經系統最常見的難治性腫瘤，存在多種異常表達miRNA。我們前期研究發現miR-93在膠質瘤中異常高表達，其表達受EGFR/STAT3信號通路調節。抑制miR-93可抑制膠質瘤細胞周期進展。 Rb家族成員RBL2/p130這一重要的細胞周期負調控因子是miR-93的潛在靶點。故我們提出EGFR/STAT3轉錄調控miR-93靶向RBL2/p130調節細胞周期的新機制，擬通過1.CHIP-PCR技術驗證STAT3對miR-93的直接轉錄調控作用；2.螢光素酶實驗驗證RBL2/p130是miR-93的直接作用靶點；3.miR-93和RBL2/p130恢復實驗驗證miR-93靶向RBL2/p130在EGFR/STAT3激活的細胞周期進展中的作用。本研究可闡明膠質瘤中EGFR/STAT3信號通路轉錄調控miR-93而異常激活細胞周期的機制，為膠質瘤的靶向基因治療提供新靶點。
結題摘要
微RNA（micro RNA, miRNA）依然是目前分子生物學研究領域的一個熱點和難點。實驗已證明其中許多miRNA在生物體發育，疾病發生髮展的過程中發揮著重要作用。因為缺乏精確的預測miRNA的調控靶基因的方法，依然需要大量的生物學實驗來明確與疾病相關的miRNA的下游靶基因及其通過靶基因參與疾病發生髮展過程的機制。 通過本項目的研究，我們明確了RB家族成員中，只有RBL2受到miR-106b、-93的直接靶向調控。並驗證了miR-106b、-93通過抑制RBL2蛋白的表達進而影響細胞周期進展相關因子E2F1、CyclinD1、p21的表達而影響膠質瘤細胞的增殖。 我們通過體內實驗驗證了靶向抑制miR-106b、-93後，異種移植小鼠荷載的LN229膠質瘤的生長被明顯抑制。Western blot和石蠟切片的免疫組織化學檢測顯示腫瘤組織內細胞周期進展相關蛋白，在miR-106b、-93被抑制後受到調控，進而影響腫瘤組織的生長。細胞增殖指標PCNA也在miRNA被抑制時表達降低，表明細胞增殖能力減弱。TUNEL法檢測腫瘤細胞凋亡情況，結果顯示，miR-106b、-93抑制劑治療後可引起膠質瘤組織內細胞大量凋亡。 另外，我們建立了裸鼠顱內異種膠質瘤原位模型，並運用該模型通過螢光素酶活性檢測評估了反義miR-93裸鼠顱內抑制膠質瘤生長的作用。結果顯示，反義miR-93慢病毒感染過的U87細胞顱內成瘤速度明顯慢於陰性對照組，且總體生存期長於對照組。 我們進一步進行了miR-93表達的轉錄調控研究。明確了，miR-93轉錄調控過程中STAT3並非占主導作用，可能存在其他未知因素影響miR-93的表達。通過對TCGA資料庫中膠質母細胞瘤標本的RNA測序結果的分析，我們發現MYC基因與miR-93在不同膠質母細胞瘤標本中有著相似的表達水平，初步推斷miR-93的表達可能受MYC基因調控。我們發現在膠質瘤細胞中轉染外源c-MYC基因後，miR-93的表達可被明顯誘導。 通過本研究我們明確了miR-93通過靶向細胞周期抑制因子RBL2/p130促進膠質瘤細胞周期進展的機制，並發現轉錄因子STAT3並非調控miR-93的表達的關鍵轉錄因子，而c-MYC基因可能在miR-93表達的轉錄調控過程中發揮重要作用。
