腦脊液載脂蛋白

腦脊液載脂蛋白,是決定脂蛋白性質的主要蛋白成分。

基本介紹

  • 中文名:腦脊液載脂蛋白
  • 釋義:決定脂蛋白性質的主要蛋白成分
蛋白簡介,醫學檢查,

蛋白簡介

組成脂蛋白的特殊蛋白稱為Apo。在不同的脂蛋白中,Apo的種類、含量和功能也不同。Apo的主要功能有:①構成脂蛋白,使血漿脂質成為可溶性。②激活或抑制脂蛋白代謝有關的酶。③識別脂蛋白受體,與特異性脂蛋白受體結合。④結合和轉運脂質,穩定脂蛋白結構等。

醫學檢查

檢查名稱
腦脊液載脂蛋白
分類
體液和排泄物檢查 -腦脊液檢查
化驗取材
腦脊液
腦脊液載脂蛋白的測定原理
聚苯乙烯微量反應板為固相載體,以apo(a)單克隆抗體(McAb)包被,加入待測標本,使其中的apo(a)與固相化的McAb結合,洗滌除去未結合的標本中其他蛋白質,再加入酶標記的apo(a)McAb,與結合到固相抗體上的apo(a)作用,洗滌除去未結合的酶標記物。加入酶的相應底物產生顏色反應,顯色的程度決定於結合在固相載體的apo(a)量。
McAb套用雜交瘤技術製備,以超速離心結合層析法純化的LP(a)為抗原。所製備的McAb應與apoB及纖溶酶原(PMG)無交叉反應。混合數株識別apo(a)上不同抗原位點的McAb,用於建立血清LP(a)雙抗體夾心法。
試劑
(1)包被緩衝液:0.02mol/L碳酸鹽緩衝液pH9.5;
(2)包被抗體與酶標抗體:用McAb混合液,以(NH4)2SO4沉澱法製備抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以過碘酸鹽法交聯辣根過氧化物酶(RZ≥3)得酶標抗體,-20℃保存可穩定數月;
(3)稀釋/封閉液:pH7.4緩衝液含磷酸鹽0.01mol/L及氯化鈉0.15mol/L,臨用前取適量緩衝液,加入適量小牛血清及吐溫-20;
(4)底物溶液:0.1mol/L枸櫞酸及0.2mol/L Na2HPO4緩衝液,pH5.0,臨用前每100ml緩衝液中加入鄰苯二胺0.1g及30%H2O2 0.1ml;
(5)終止液:2mol/L H2SO4;
(6)洗滌液:0.15mol/L NaCl,每升含吐溫-20 0.5ml;
(7)參考血清:目前尚無公認的定值血清,可暫用商品(如BM公司產品,1410962)。
操作方法
(1)單向免疫擴散法。
(2)火箭免疫電泳法。
(3)ELISA法。
正常值
(1)單向免疫擴散法:未測出ApoB100、CⅡ,而ApoCⅢ含量極微;ApoA1為0.01±0.0054g/L,ApoE為0.0069±0.0016g/L與22.2%。
(2)火箭免疫電泳法:ApoA1 0.04±0.01g/L。
(3)ELISA法:ApoE 0.008±0.001g/L。。
化驗結果臨床意義
腦脊液中載脂蛋白含量遠低於血液水平,免疫組化試驗證明大腦額葉的星形膠質細胞及某些神經元能合成ApoE,而CSF中的ApoA1與ApoCⅡ可能從血中滲入。但當患神經系統疾病時,可致血腦屏障功能受到損害。使其通透性增高,血液中ApoA1可更多滲入CSF中,ApoA1含量增加;因ApoB100分子量大不能透過,故腦膜炎、腦血管病,腦囊蟲患者ApoA1、ApoE在CSF中的水平均升高。載脂蛋白的測定可為診斷某些神經系統病提供有價值的信息。
附註
(1)LP(a)顆粒中apo(a)與apoB以二硫鍵相聯結;apo(a)的胺基酸組成與PMG有高度同源性,故用LP(a)給動物免疫所得抗血清(多克隆抗體)中同時有抗apoB與PMG抗體,通常用親和層析法純化,不易獲得純apo(a)抗體。但用雜交瘤技術製備的McAb可以避免與apoB及PMG的交叉反應。
(2)為了避免孔間差異,減少誤差,同一標本最好平行做2~3份,取平均值。
(3)應嚴格掌握稀釋的精密度,由於血清LP(a)水平可小於10mg/L或高達1000mg/L以上,對過高過低的標本應調整稀釋倍數後重新測定。
(4)包被抗體與酶標抗體不可反覆冰凍融化,稀釋/封閉液及底物液應新鮮配製。空白吸光度增高可能由於底物溶液陳舊或封閉不充分。
(5)本法批內CV﹤5%,批間CV﹤9%。實驗誤差來源有板間差、孔間差、稀釋及加樣誤差、試劑質量及孵育時間等。

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