基本介紹
- 中文名：腦脊液載脂蛋白
- 釋義：決定脂蛋白性質的主要蛋白成分
蛋白簡介,醫學檢查,
蛋白簡介
組成脂蛋白的特殊蛋白稱為Apo。在不同的脂蛋白中，Apo的種類、含量和功能也不同。Apo的主要功能有：①構成脂蛋白，使血漿脂質成為可溶性。②激活或抑制脂蛋白代謝有關的酶。③識別脂蛋白受體，與特異性脂蛋白受體結合。④結合和轉運脂質，穩定脂蛋白結構等。
醫學檢查
檢查名稱
腦脊液載脂蛋白
分類
體液和排泄物檢查 -腦脊液檢查
化驗取材
腦脊液
腦脊液載脂蛋白的測定原理
用聚苯乙烯微量反應板為固相載體，以apo（a）單克隆抗體（McAb）包被，加入待測標本，使其中的apo（a）與固相化的McAb結合，洗滌除去未結合的標本中其他蛋白質，再加入酶標記的apo（a）McAb，與結合到固相抗體上的apo（a）作用，洗滌除去未結合的酶標記物。加入酶的相應底物產生顏色反應，顯色的程度決定於結合在固相載體的apo（a）量。
McAb套用雜交瘤技術製備，以超速離心結合層析法純化的LP（a）為抗原。所製備的McAb應與apoB及纖溶酶原（PMG）無交叉反應。混合數株識別apo（a）上不同抗原位點的McAb，用於建立血清LP（a）雙抗體夾心法。
試劑
（1）包被緩衝液：0.02mol/L碳酸鹽緩衝液pH9.5；
（2）包被抗體與酶標抗體：用McAb混合液，以（NH4）2SO4沉澱法製備抗人apo（a）-IgG，部分作包被用，部分以過碘酸鹽法交聯辣根過氧化物酶（RZ≥3）得酶標抗體，－20℃保存可穩定數月；
（3）稀釋/封閉液：pH7.4緩衝液含磷酸鹽0.01mol/L及氯化鈉0.15mol/L，臨用前取適量緩衝液，加入適量小牛血清及吐溫-20；
（4）底物溶液：0.1mol/L枸櫞酸及0.2mol/L Na2HPO4緩衝液，pH5.0，臨用前每100ml緩衝液中加入鄰苯二胺0.1g及30%H2O2 0.1ml；
（5）終止液：2mol/L H2SO4；
（6）洗滌液：0.15mol/L NaCl，每升含吐溫-20 0.5ml；
（7）參考血清：目前尚無公認的定值血清，可暫用商品（如BM公司產品，1410962）。
操作方法
（1）單向免疫擴散法。
（2）火箭免疫電泳法。
（3）ELISA法。
正常值
（1）單向免疫擴散法：未測出ApoB100、CⅡ，而ApoCⅢ含量極微；ApoA1為0.01±0.0054g/L，ApoE為0.0069±0.0016g/L與22.2%。
（2）火箭免疫電泳法：ApoA1 0.04±0.01g/L。
（3）ELISA法：ApoE 0.008±0.001g/L。。
化驗結果臨床意義
腦脊液中載脂蛋白含量遠低於血液水平，免疫組化試驗證明大腦額葉的星形膠質細胞及某些神經元能合成ApoE，而CSF中的ApoA1與ApoCⅡ可能從血中滲入。但當患神經系統疾病時，可致血腦屏障功能受到損害。使其通透性增高，血液中ApoA1可更多滲入CSF中，ApoA1含量增加；因ApoB100分子量大不能透過，故腦膜炎、腦血管病，腦囊蟲患者ApoA1、ApoE在CSF中的水平均升高。載脂蛋白的測定可為診斷某些神經系統病提供有價值的信息。
附註
（1）LP（a）顆粒中apo（a）與apoB以二硫鍵相聯結；apo（a）的胺基酸組成與PMG有高度同源性，故用LP（a）給動物免疫所得抗血清（多克隆抗體）中同時有抗apoB與PMG抗體，通常用親和層析法純化，不易獲得純apo（a）抗體。但用雜交瘤技術製備的McAb可以避免與apoB及PMG的交叉反應。
（2）為了避免孔間差異，減少誤差，同一標本最好平行做2～3份，取平均值。
（3）應嚴格掌握稀釋的精密度，由於血清LP（a）水平可小於10mg/L或高達1000mg/L以上，對過高過低的標本應調整稀釋倍數後重新測定。
（4）包被抗體與酶標抗體不可反覆冰凍融化，稀釋/封閉液及底物液應新鮮配製。空白吸光度增高可能由於底物溶液陳舊或封閉不充分。
（5）本法批內CV﹤5%，批間CV﹤9%。實驗誤差來源有板間差、孔間差、稀釋及加樣誤差、試劑質量及孵育時間等。
