脊索動物文昌魚LITAF在先天免疫應答中的功能機制研究

《脊索動物文昌魚LITAF在先天免疫應答中的功能機制研究》是依託南京師範大學，由金萍擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：脊索動物文昌魚LITAF在先天免疫應答中的功能機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：金萍
• 依託單位：南京師範大學

項目摘要

先天免疫是動物對抗外源病原的重要方式。脂多糖誘導的TNFα因子（lipopolysaccharide-induced TNFα factor, LITAF）是一類保守的轉錄因子，在動物先天免疫中發揮重要作用。LITAF突變和腓骨肌萎縮症CMT1C型相關，其功能機制未明。本項目以進化地位關鍵物種文昌魚為對象，研究LITAF在動物先天免疫中的功能。基於前期結果，擬採用qRT-PCR、原位雜交及western blot檢測LITAF基因應答LPS刺激的時空表達譜；利用p38α抑制劑、GST-Pulldown、Co-IP串聯質譜分析LITAF與上游蛋白p38α及STAT6B的互作關係，驗證LITAF在先天免疫應答中的保守機制；在HEK293細胞內轉染文昌魚LITAF研究其亞細胞定位及對TNFα的轉錄調控。此外，以比較基因組學方法分析脊索動物LITAF信號通路進化，探索脊索動物先天免疫的起源和進化。

結題摘要

先天免疫普遍存在於無脊椎動物與脊椎動物中，是動物對抗外源病原的重要方式，對於維持機體的免疫平衡起著關鍵的作用。脂多糖誘導的TNFα因子（lipopolysaccharide-induced TNFα factor, LITAF）是一類保守的轉錄因子，在動物先天免疫中發揮重要作用。同時LITAF還與一些疾病密切相關，包括腓骨肌萎縮症CMT1C亞型、炎症性關節炎、前列腺癌及胰腺癌等。我們圍繞進化地位上介於無脊椎與脊椎動物之間的的“活化石”物種文昌魚開展LITAF介導的先天免疫應答機制研究。在項目實施期間，我們通過qRT-PCR及western blot方法明確了文昌魚LITAF參與先天免疫調控的功能及機制；通過同源搜尋及克隆方法獲得了LITAF上游激酶p38及ERK2基因的全長序列，並進一步通過western blot方法確定了其參與文昌魚體內的先天免疫應答，並進行了系統的進化分析；將LITAF互作蛋白STAT6B在文昌魚基因組資料庫中進行了同源搜尋，文昌魚中只包含STAT家族蛋白AmphiSTAT5.0及AmphiSTAT5.1，獲得其全長序列，並分別構建了真核表達載體，CoIP法分析了LITAF蛋白及AmphiSTAT蛋白在細胞內的表達及互作關係。通過以上研究我們已經完善了文昌魚LITAF介導的免疫通路的關鍵分子，並對相關分子的免疫應答機製做了系統的研究。在此基礎上我們還進一步探究miRNA是否及如何參與文昌魚先天免疫調控，通過高通量測序及晶片方法篩選了14個免疫相關的miRNA，並進行了初步的功能分析。本項目的完成有助於加深對LITAF介導的先天免疫調控機制的認識，為更全面的調節文昌魚先天免疫調控網路奠定基礎。