《脂肪酸合成通路涉及Wolbachia介導伊蚊抗登革病毒作用》是依託中山大學，由吳瑜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：脂肪酸合成通路涉及Wolbachia介導伊蚊抗登革病毒作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳瑜
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
登革病毒是一種以伊蚊（白紋伊蚊和埃及伊蚊）為傳播媒介的RNA病毒，可以引起登革熱和重症登革熱。登革熱是全球最重要的再現蚊媒傳染病之一，目前登革熱的治療缺乏特異性藥物和有效的疫苗，蚊媒控制是首選的預防及阻斷傳播的方法。Wolbachia是一類廣泛存在於節肢動物體內，由胞質遺傳的共生立克次體。感染了Wolbachia的伊蚊對登革病毒感染產生抗性。我們前期的研究結果提示：Wolbachia抑制伊蚊的脂肪酸合酶表達，可能從能量代謝通路介導伊蚊抗登革病毒作用。本項目擬套用RNAi技術從細胞水平和蚊體水平抑制脂肪酸合酶的表達，比較Wolbachia感染組和去感染組登革病毒複製水平的差異，鑑定脂肪酸對登革病毒複製的重要性；並通過補充外源脂肪酸來恢復登革病毒的複製水平。通過本項目的研究，可以從能量代謝角度闡明Wolbachia抑制登革病毒在蚊體複製的作用機制，為控制蚊蟲傳播登革病毒新策略的研製提供依據。
結題摘要
沃爾巴克氏體（Wolbachia）是一種在自然界節肢動物體內廣泛存在、能經卵傳遞的革蘭陰性胞內共生菌。估計約65%的昆蟲種類和28%的蚊蟲種類天然攜帶沃爾巴克氏體。攜帶沃爾巴克氏體的雄蚊與不攜帶沃爾巴克氏體的雌蚊交配產生的蚊卵不能正常孵化，引起胞質不相容性。通過持續釋放攜帶新型Wolbachia白紋伊蚊雄蚊，使外界的蚊子數量逐漸降低,甚至區域性根除，從而阻斷登革熱的流行。同時，部分沃爾巴克氏體在蚊媒體內能對多種人類病原體（如登革病毒、黃病毒和瘧原蟲等）產生抗性。 我們實驗室通過顯微胚胎注射方法建立了攜帶沃爾巴克氏體wAlbB的埃及伊蚊株（wAlbB-Aedes aegypti Guangdong strain, GDB）和攜帶沃爾巴克氏體wPip的白紋伊蚊株(wPip- Aedes albopictus Guangdong strain, GDP)。通過比較不同尺寸的蚊籠、不同密度的成蚊飼養條件，我們建立了白紋伊蚊中等規模生產的最優方案：採用90 × 30 × 30 cm的大蚊籠，每籠16,000隻成蚊（雌：雄=3:1），血餐中添加0.05 g / ml ATP可以增加雌蚊吸血率，從而提高蚊卵數量， 15天飼養周期每籠成蚊可以生產1000萬個蚊卵。 套用real time PCR檢測攜帶wAlbB的埃及伊蚊成蚊不同組織中（卵巢、中腸、脂肪體）沃爾巴克氏體密度，比較wAlbB埃及伊蚊與野生株埃及伊蚊經口感染登革病毒後 ，病毒拷貝數以及脂肪酸合酶基因表達水平。結果顯示wAlbB埃及伊蚊對登革病毒感染具有抑制作用，抑制效果與Wolbachia密度呈正相關，與脂肪酸合酶表達水平呈負相關。 在埃及伊蚊Aag2-Wolbachia(-)細胞中套用RNAi沉默脂肪酸合酶FAS基因，登革病毒感染被明顯抑制。再補充脂肪酸可恢復登革病毒感染水平。在埃及伊蚊Aag2-Wolbachia(+)細胞培養液中補充脂肪酸，登革病毒感染水平恢復。在埃及伊蚊wAlbB GDB株中補充脂肪酸，登革病毒感染水平恢復。在廣東埃及伊蚊野生株中(Wolbachia-)株中套用RNAi沉默FAS基因，登革病毒感染被明顯抑制。再補充脂肪酸可恢復登革病毒感染水平。結果提示wAlbB埃及伊蚊對登革病毒感染的抗性與Wolbachia抑制蚊蟲脂肪酸合成酶的表達有關。本研究
