《脂筏標誌蛋白FLOT1在肺腺癌轉移中的作用及分子機制研究》是依託中南大學，由張鵬飛擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：脂筏標誌蛋白FLOT1在肺腺癌轉移中的作用及分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張鵬飛
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
申請人前期肺腺癌膜蛋白質組研究發現：脂筏標誌蛋白Flotillin-1(FLOT1) 高表達與肺腺癌轉移相關。為揭示FLOT1在肺腺癌轉移中的作用及其分子機制，項目首先建立FLOT1表達下調的肺腺癌細胞系，分析FLOT1表達下調對肺腺癌細胞體外和體內侵襲轉移能力的影響；探討FLOT1表達改變對EGFR/PI3K/AKT/FOXO3a信號通路活性的影響及其與肺腺癌轉移的關係；最後採用靶向蛋白質組學分離鑑定肺腺癌細胞中FLOT1的互作蛋白，免疫共沉澱-Western blot以及免疫螢光雙標記雷射共聚焦技術等驗證FLOT1的互作蛋白，並採用生物信息學解析其生物學意義，以發現FLOT1的相互作用蛋白網路和涉及的信號通路。項目研究成果不僅有助於揭示FLOT1促進肺腺癌轉移的作用及其分子機制，而且能為肺腺癌轉移預警和靶向治療提供靶標。
結題摘要
近年來AdC的發病率呈逐步上升，且患者預後差、死亡率高，嚴重威脅我國人民的健康和生命。絕大多數AdC易發生早期轉移，癌細胞轉移已成為了影響AdC患者預後的關鍵因素。AdC轉移是一個多基因參與的過程，多個基因之間通過相互作用形成關鍵性的節點，這些節點在AdC轉移中具有重要作用。我們前期實驗採用蛋白質組學方法篩選AdC質膜組織差異表達的蛋白質，鑑定了36個差異質膜蛋白質，採用Western blot和免疫組化學染色檢測差異蛋白質FLOT1在癌旁正常肺組織、AdC組織以及有淋巴結轉移AdC組織的表達情況。結果發現：FLOT1表達水平與AdC轉移、臨床分期以及預後密切相關，提示FLOT1表達升高在AdC轉移中可能具有重要作用。 為此，我們採用靶向蛋白質組學方法(免疫共沉澱結合質譜分析)分離鑑定AdC細胞中FLOT1的相互作用蛋白，通過基因本體論(GO)、功能聚類、信號通路和蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction, PPI)等生物信息學方法分析FLOT1的相互作用蛋白，揭示其生物學意義，並對關鍵相互作用蛋白進行實驗驗證和功能研究。主要結果如下：1、採用靶向蛋白質組學在細胞中鑑定出1080個FLOT1的相互作用蛋白，這些蛋白有已經報導FLOT1發生相互作用的蛋白，如FGR，CD44，CAV1，ITAV 等， 2、GO和聚類分析：1080個FLOT1的相互作用蛋白可聚類成208個功能相關的簇，這些蛋白的功能主要歸類為16個方面，3、KEGG和Biocarta信號通路分析：FLOT1的相互作用蛋白涉及28 條Biocarta信號通路和62條KEGG信號通路，其中15個蛋白質相互作用涉及到蛋白質泛素化泛素化途徑，11個相互作用蛋白涉及到PI3K/EGFR信號通路，8個相互作用蛋白涉及到NF-kappaB信號通路。PIP分析顯示：與FLOT1的直接作用的蛋白質大多數參與PI3K/EGFR或NF-kappaB信號傳導通路。結果提示：FLOT1表達上調可能通過調節PI3K/EGFR信號通路和NF-kappaB信號通路促進肺腺癌侵襲轉移。
