胸腺五肽

胸腺五肽由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸、酪氨酸五種胺基酸組成。其化學名稱為 N-〔N-〔N-〔NL-精氨醯-L-賴氨醯〕-L-α-天冬氨醯〕-L-纈氨醯〕-L-酪氨酸。分子式：C30H49N9O9 。分子量：679.77。

胸腺分泌物的一種胸腺生成素Ⅱ的有效部分。胸腺生成素Ⅱ是從胸腺激素中分離出來的單一多肽化合物，由49個胺基酸組成，而其中由5個胺基酸組成的肽鏈片段，卻有著與胸腺生成素II相同的全部生理功能，所以就把這個五肽片段稱為胸腺五肽。白色凍乾疏鬆塊狀物或粉末。

基本介紹

• 中文名：胸腺五肽
• 外文名：Thymopentin
• CAS號：69558-55-0
• 分子式：C30H49N9O9

化合物簡介

基本信息

中文名稱：胸腺五肽

中文別名：胸腺生成素;剎莫潘汀;

英文名稱：Thymopentin

英文別名：Timunox;Arg-Lys-Asp-Val-Tyr;HArgLysAspValTyrOH;RKDVY;THYMOPENTIN 5;TP-5;Sintomodulina;thymopoietin;Immunox;THYMOPETIN;thymopoietin fragment 32-36;

CAS號：69558-55-0

分子式：C₃₀H₄₉N₉O₉

分子量：679.76500

結構式：

精確質量：679.36500

PSA：325.17000

LogP：1.96390

物化性質

密度：1.44 g/cm³

折射率：1.635

儲存條件：-20ºC

生產方法

TP-5的製備方法主要有液相合成法和固相合成法兩種。

TP-5的液相合成：

(1)採用Boc(叔丁氧羰基)和Fmoc(9 -芴甲氧羰基)策略相結合的液相方法合成TP-5:保護胺基酸原料分別為:HCl·H-Tyr(Bzl)-OBzl、Boc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 縮合試劑為BOP-HOBt, 縮合時間2 h, 反應溶劑為三氯甲烷, 鹼中和試劑採用N-甲基嗎啉(NMM)。最後保護基的脫除系統採用三氟甲磺酸/三氟醋酸(TFMSA/TFA)+苯甲硫醚, 0 ℃反應2 h。

(2)採用Boc氨基保護策略和碳鏈逐步增長法液相合成TP-5：氨基採用Boc-HCl/二噁烷保護系統, DCC-HOBt縮合得到全保護的Boc-Arg(Tos)-Lys(Z)-Asp(OBz1)-Val-Tyr(Bz1)-OMe, 皂化後, 採用TFA/TFMSA+苯甲醚、茴香硫醚和鄰甲基苯酚, 室溫反應1h, 脫除側鏈得白色結晶, 純化後總收率30%。

(3)採用液相最小保護策略逐步合成TP-5：胺基酸保護策略為:HC1· Tyr-OMe、Boc-Val-OH、Boc-Asp(OBz1)-OH、Boc-Lys(2C1Z)-OH、Z-Arg-OH, DCC-HOBt縮合形成二肽、三肽和四肽, HBTU縮合形成保護五肽, 最後採用Pd/C氫解脫除側鏈保護得到目的產物。在不發生較大副反應的前提下, 側鏈功能基儘量不採取保護, 可以避免HF的強酸裂解, 條件比較溫和, 更適合於產業化。

TP-5 的固相合成

固相法主要有Boc/Bzl和Fmoc/OtBu兩種合成保護策略。

(1)Boc固相合成法:Boc合成法的主要策略是採用TFA可脫除的Boc為α-氨基保護基, 側鏈保護採用苄醇類。合成時將一個Boc-胺基酸衍生物共價交聯到Merrifield或MBHA樹脂上, 用TFA脫除Boc,用三乙胺中和游離的氨基末端, 然後通過DCC活化、偶聯下一個胺基酸, 最終脫保護多採用HF法或TFMSA法。

(2)Fmoc固相合成法:Fmoc法與Boc法的根本區別在於採用了鹼可脫除的Fmoc為α-氨基的保護基, 側鏈的保護採用TFA可脫除的叔丁氧基等,樹脂採用90%TFA可切除的對烷氧苄醇型樹脂和1%TFA可切除的二烷氧苄醇型樹脂, 最終的脫保護避免了強酸處理。Fmoc作為氨基保護基的優點在於其對酸穩定, 用TFA等試劑處理不受影響, 僅需用溫和的鹼處理, 通過β 2消除反應即可脫去, 不需用三級胺中和, 且Fmoc基團有特徵性紫外吸收, 易於檢測反應的進行, 給自動化合成帶來方便。但Fmoc保護的胺基酸價格昂貴, 合成成本也相應較高。在TP-5的Fmoc固相合成中, 採用Wang樹脂,DMF為溶劑, DIC-HOBt縮合, 側鏈保護策略為:Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

胸腺生成素-II的製備

原料處理、濃縮 以小牛胸腺為原料，加入0.1mol/L NH4HCO3，攪勻提取，得鹼性蛋白液，加熱至70℃除去變性雜蛋白，去除沉澱，將上清液濃縮。

小牛胸腺[0.1 mol/L NH4HCO3]→鹼性蛋白液[70℃, 去雜蛋白]→[濃縮]濃縮液
分離、層析、精製 經SephadexG-50和羥基磷石灰柱層析，分離，再經QAE-Sephadex柱層析，精製，即得胸腺生成素-II

濃縮液[Sephadex G-50]→[羥基磷石灰柱]層析液[QAE-Sephadex 柱]→胸腺生成素-II

胸腺生成素-II的提取

原料處理、超過濾、離心 以新鮮牛脾為原料，加入0.1 mol/L NH4HCO3，勻漿提取，得鹼性可溶性蛋白。用H10×100超過濾，將濾液濃縮，水浴加熱至70℃，離心15 min，留上清液。

新鮮牛脾[0.1 mol/L NH4HCO3]→鹼性蛋白液[超過濾，濃縮]→[70℃，離心15min]上清液

過柱純化 取上清液調節pH為5.2，加入陽離子交換樹脂(50 mg/ml)，攪拌，過濾，再將濾液調節pH為9.5，加入陽離子交換樹脂(50mg/m1)，攪拌，過濾，得濾液。

上清液[pH5.2, 陽離子柱]→濾液[pH9.5, 陽離子柱]→濾液

凝膠濾過、純化 濾液經Sephadex G-75凝膠過濾，得活性TP和泛激素，再經陰離子交換樹脂層析(NH4HCO3, 離子強度變化0.1-0.8mol/L)，得 TP-III、雜蛋白和泛激素。

濾液[Sephadex G-75凝膠過濾]→活性TP和泛激素[陰離子樹脂層析]→得TP-III、雜蛋白和泛激素。

用途

一般用作胸腺五肽注射液，主治：可用於惡性腫瘤病人經放化療後，免疫功能損傷者。

藥典標準

主要活性成分

N-[N-[N-[NαL-精氨醯-L-賴氨醯[-L-α-天門冬氨醯]-L-纈氨醯]，L-酪氨酸。按乾燥品計算，含C30H49N9O9不得少於95.0%。

性狀

白色凍乾粉末。

在水中極易溶，在乙醇中微溶、在乙酸乙酯、乙醚或石油醚中不溶。

鑑別

（1）取本品1mg，加水1ml溶解後，吸取20μl點於濾紙上，涼乾，噴以0.1%茚三酮溶液（取0.1g茚三酮，加無水乙醇90ml和正丁醇10ml溶解），置105℃中乾燥5分鐘，應顯藍紫色斑點。

（2）取本品1mg，加水1ml溶解後，加鹼性酒石酸銅試液2滴，即顯藍紫色。

（3）取本品，加水製成每1ml中含50μg的溶液，照分光光度法（中國藥典1995年版二部附錄ⅣA），在275nm波長處有最大吸收。

檢查

溶液的澄清度與顏色 取本品5mg，加水5ml溶解後，溶液應澄清無色。

其他肽 取本品，加水製成1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加水製成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典1995年版二部附錄ⅤB頁）試驗，吸取上述兩種溶液1μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-水-冰乙酸（4∶1∶5）為展開劑，展開後，晾乾，噴以茚三酮溶液（取茚三酮0.1g，加無水乙醇90ml和正丁醇10ml使溶解），在105℃乾燥5分鐘，檢視。供試品溶液如顯雜質斑點，不得多於1個，其顏色與對照品溶液的主斑點比較，不得更深（5.0%）。

乾燥失重 取本品，以五氧化二磷為乾燥劑，減壓乾燥至恆重，減失重量不得過5.0%（中國藥典1995年版二部附錄ⅧL）。

熱原取本品，加滅菌注射用水製成每1ml中含60μg的溶液，依法檢查（中國藥典1995年版二部附錄ⅪD），劑量按家兔體重每1kg注射1ml，應符合規定。

含量測定

照高效液相色譜法（中國藥典1995年版二部附錄ⅤD）測定。

色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基矽鍵合矽膠為填充劑，pH7.0磷酸鹽緩衝液-甲醇（60∶40）為流動相；檢測波長為275nm。理論板數按胸腺五肽峰計算應不低於1200。取對照品溶液20μl，重複注樣5次，其峰面積的變異係數應不大於1.5%。

對照品溶液的製備 取胸腺五肽對照品適量，精密稱定，加pH7.0磷酸鹽緩衝液溶解並定量稀釋製成每1ml中約含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。

測定法 取本品適量，精密稱定；加pH7.0的磷酸鹽緩衝液溶解並定量稀釋製成每1ml中約含胸腺五肽0.5mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取胸腺五肽對照品溶液適量，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

作用與用途

改善惡性腫瘤病人因放化療而致免疫功能低下。

用法與用量

臨用前，加滅菌注射用水適量使溶解。每天一次，每次1mg，療程30天，肌肉注射，與放化療藥物同時使用。

概況

TP是從小牛胸腺提取的一種多肽，發現兩種相似的類型：胸腺生成素-I (TP-I)和胸腺生成素-II(TP-II)。TP-II為49肽，由13種胺基酸組成。TP-I和TP-II的結構差異是TP-II肽鏈上絲1和蘇43改變為TP-I的甘1和組43。精32-酪36的五肽在體內外均顯示出TP-II的T細胞分化活性。49個胺基酸中5個有生理活性，現已人工合成精 賴天胺纈酪5肽，即胸腺噴丁(timopentin)，並用於臨床。

另外，從牛脾中分離的脾臟素(splenin)與TP-II相似，所以稱為TP-III。人工合成的TP-II的5肽暫稱為胸腺合成素(TPe)，合成的TP-III的5肽暫稱為脾臟合成素(SPe)。TP-II和TPe作用於神經肌肉傳遞，誘導T細胞前體細胞的體外分化，同時抑制B細胞的分化。TP-III和SPe則可誘導T、B細胞前體細胞的分化。泛激素(Ubiquitin)由74個胺基酸殘基組成，可誘導T細胞、B細胞分化，廣泛存在於動物組織(含胸腺)和植物、菌類細胞中，與免疫功能有關。

藥物作用

胸腺五肽的作用之一是誘導T細胞分化。它可選擇性地誘導Thy-1-的前胸腺細胞轉化為Thy-1+的T細胞。其T細胞分化作用由胞內cAMP水平升高介導。胸腺五肽的另一基本作用是對成熟外周血T細胞的特異受體結合，使胞內cAMP水平上升，從而誘發一系列胞內反應，這也是它免疫調節功能的基礎。在正常機體狀態下胸腺五肽顯現免疫刺激作用，能顯著增高脾淋巴細胞的E玫瑰花結形成率及轉化率，對免疫應答的初次或再次反應的不同階段都有增強作用，能增多IgM類型和IgG或IgA類型的抗體形成細胞。胸腺五肽還可增強巨噬細胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白細胞的酶和吞噬功能，升高循環抗體含量，增強紅細胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8陽性細胞，使專一的Tc細胞壽命維持更長時間，同時也可活化Th細胞，誘導Ts細胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治療作用與它增進TC細胞活性相關。在抗感染免疫中適量胸腺五肽可明顯增加干擾素的產生。誘導和促進T細胞分化成熟；調節T淋巴細胞亞群比例使CD4/CD8趨於正常 ；增強巨噬細胞吞噬功能 ；增強紅細胞免疫功能 ；提高自然殺傷細胞的活力 ；提高白介素-2的產生水平與受體表達水平；增強外周血單核細胞γ干擾素的產生 ；增強血清中SOD活性。

可用於惡性腫瘤病人經放化療後，免疫功能損傷者 ；B型肝炎的治療 ；重大外科手術及嚴重感染 ；自身免疫性疾病，如類風濕性關節炎，紅斑狼瘡；Ⅱ型糖尿病、更年期綜合徵；年老體衰免疫功能低下者。

適應症

（1）用於18歲以上的慢性B型肝炎患者。

（2）各種原發性或繼發性T細胞缺陷病（如兒童先天性免疫缺陷病）。

（3）某些自身免疫性疾病（如類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡)。

（4）各種細胞免疫功能低下的疾病。

（5）腫瘤的輔助治療。

用法用量

1. 皮下注射
(1)原發性免疫缺陷：開始時一日0.5～1mg/kg，連續2周；維持量為一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。
(2)繼發性免疫缺陷：一次50mg，每周3次，連續3～6周。

2. 肌肉注射
(1)原發性免疫缺陷：開始時一日0.5～1mg/kg，連續2周；維持量為一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。
(2)改善惡性腫瘤患者的免疫功能低下：與放療、化療同時使用，一日1次，一次1mg/kg，28日為一療程。

禁忌

1. 對本品有過敏反應者或器官移植者禁用。

2. 已使用免疫抑制治療的患者(如器官移植者)禁用。

不良反應

(1)耐受良好，個別可見噁心、發熱、頭暈、胸悶、無力等不良反應，少數患者偶有嗜睡感。

(2)慢性B型肝炎患者使用時可能ALT水平短暫上升，如無肝衰竭預兆出現，仍可繼續使用本品。

注意事項

1. 本品通過增強患者的免疫功能而發揮治療作用，故對正在接受免疫抑制治療的患者(例如器官移植受者)不應使用本品，除非治療帶來的裨益明顯大於危險性。

2. 治療期間應定期檢查肝功能。

3. 目前尚不知道本藥是否對胚胎有傷害，或是否影響生育能力。故本藥只能在十分必要時才給孕婦使用。目前儘管未證實本品經人乳排出，但用於哺乳期婦女仍應特別慎重。

4. 在18歲以下患者，本藥的安全性和有效性尚未確立。

5. 目前尚無任何關於人體過量(治療或意外)的報導。動物毒性實驗顯示在10mg/kg劑量以下(目前研究所用最大量)沒有任何副反應發生。

孕婦及哺乳期婦女用藥

動物生育研究顯示，在對照組及本藥治療組，其胚胎異常影響無任何差異。目前尚不知道本藥是否對胚胎有傷害，或是否影響生育能力。故本藥只能在十分必要時才給予孕婦使用。目前儘管未證實本品經人乳排出，但用於哺乳期應特別慎重。

藥物相互作用

1.本品與許多常用藥物合併使用，其中包括干擾素、消炎藥、抗生素、激素、鎮痛藥、降壓藥、利尿藥、治療心血管疾病的藥物、中樞神經系統藥物、避孕藥，沒有任何干擾現象出現。

2.本品與干擾素合用，對於改善免疫機能有協同作用。