《胰腺星狀細胞-SHH-TRPV1在胰腺癌神經疼痛中的作用機制》是依託西安交通大學，由韓亮擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：胰腺星狀細胞-SHH-TRPV1在胰腺癌神經疼痛中的作用機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：韓亮
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
疼痛是胰腺癌重要的臨床症狀，嚴重影響患者生活質量。間質細胞過度增生導致間質纖維化是胰腺癌的典型病理特徵。我們前期研究發現SHH信號通路在間質細胞尤其是星狀細胞的活化和生物效應過程中起重要作用，SHH活化星狀細胞促進腫瘤細胞和神經纖維的相向生長。因神經組織是胰腺癌疼痛的必備要素，故我們推測腫瘤細胞分泌的SHH活化胰腺星狀細胞SHH信號通路，使其分泌相關神經營養因子，進而調節神經纖維的生長和痛覺感受器（TRPV1）的表達，促進疼痛介質釋放引起疼痛。課題擬通過胰腺癌細胞-星狀細胞-背根神經節體外共培養體系，裸鼠原位種植瘤模型的建立；套用qRT-PCR，Western blot，ELISA，免疫螢光化學，膜片鉗電生理技術，VFF等方法從分子、細胞、組織和行為等不同層次，探討分析SHH通路，星狀細胞和TRPV1在胰腺癌疼痛中的相互關係。為胰腺癌疼痛的研究提供新思路。
結題摘要
目的： 通過體內、外實驗，研究胰腺癌細胞對胰腺星狀細胞sHH信號通路的作用及其對神經營養因子表達和分泌的影響，為臨床治療胰腺癌疼痛提供理論基礎和治療思路。 方法和結果： （1）胰腺癌標本中的神經組織高表達TRPV1和疼痛介質SP，CGRP。結合臨床病例資料分析發現胰腺癌組織高表達的sHH與患者的疼痛症狀和體徵存在一定正相關性。 （2）選擇高表達sHH 基因的AsPc-1細胞株和低表達sHH基因的細胞株Panc-1作為轉染對象。分別套用質粒轉染和小干擾RNA成功構建了穩定高表達sHH基因的Panc-1細胞株（Panc-1-Sh-sHH），和低表達sHH基因的AsPc-1細胞（AsPc-1-Si-sHH）。 （3）構建了胰腺癌細胞，星狀細胞和背根神經節的不同共培養體系，結果顯示胰腺星狀細胞可促進背根神經節疼痛感受性受體TRPV1和疼痛介質SP，CGRP的表達。 （4）癌細胞分泌的sHH蛋白可以活化星狀細胞的sHH信號通路分子（SMO，Gli1和Gli2），並促使其高表達NGF和BDNF。 （5）共培養體系中套用NGF或中和抗體，發現NGF可以正向調控背根神經節中TRPV1，SP和CGRP的表達和分泌，而其中和抗體則起到負向調控的作用。 （6）套用膜片鉗電生理技術檢測神經元細胞的TRPV1。結果發現，NGF和sHH均能促進細胞膜TRPV1的電流活性，聯合套用時更加強化了促進作用；而NGF中和抗體和sHH信號通路抑制劑則明顯減弱TRPV1的電流活性。 （7）構建裸鼠胰腺原位種植瘤模型，成瘤後套用機械痛敏測試儀（Von Frey Filament, VFF）評估胰腺疼痛的程度。發現高表達sHH基因的腫瘤模型對裸鼠胰腺疼痛相關行為的誘發作用明顯要強於低表達sHH的腫瘤模型。 結論： （1）胰腺癌高表達sHH，且其與胰腺癌疼痛呈正相關。 （2）胰腺星狀細胞通過sHH信號通路的活化促進胰腺癌疼痛的發生，且其sHH信號通路的活化是由胰腺癌細胞分泌的sHH實現的。 （3）胰腺星狀細胞sHH信號通路對胰腺癌疼痛的促進作用，是通過其高表達神經營養因子實現的。 （4）膜片鉗從電生理髮現sHH信號通路和NGF可明顯促進共培養體系中背根神經節神經元細胞膜TRPV1的電流變化。（5）動物模型實驗在體內驗證了sHH信號通路和星狀細胞對胰腺癌疼痛的促進作用。
