《胃癌5p15.3高頻雜合性缺失位點內NKD2抑癌基因的功能分析》是依託上海交通大學，由於穎彥擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：胃癌5p15.3高頻雜合性缺失位點內NKD2抑癌基因的功能分析
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：於穎彥
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
染色體雜合性缺失（LOH）篩查是尋找抑癌基因的一種有效手段，5p15.3是本項目組前期在胃癌研究中原創性發現的高頻LOH位點。我們已就該位點的候選抑癌基因IRX1進行了一系列功能分析，明確了該基因的抑癌功能特性，研究成果獲國際同行認可，並作為重要證據錄入NCBI基因資料庫。當前，基因資料庫內登錄有數萬條人類基因，但相當一部分基因的確切生物學功能尚不清楚，5p15.3位點內的另一候選抑癌基因NKD2便屬此類。NKD2在克隆初期被認為是Wnt信號通路的負性調控因子，但新近有研究提示其還參與其他重要功能蛋白的調控。NKD2在胃癌發生髮展中的分子機制尚缺乏系統性研究。本研究從DNA水平、mRNA轉錄、蛋白表達、NKD2的基因過表達及轉染細胞的裸鼠成瘤性與轉移能力等多角度探討NKD2基因與胃癌的關係，最終探明NKD2在胃癌發生髮展中的確切作用機制，為開發胃癌診治中的新型分子靶點提供源頭數據。
結題摘要
NKD2基因是本課題組前期在胃癌抑癌基因篩查研究中，採用LOH方法在5號染色體5p15.3位點發現高頻雜合性缺失區域內基因，該缺失區的IRX1基因已經經本課題組的系列研究確認為胃癌抑癌基因。鑒於NKD2是位於5p15.3位點的另外一個基因，該位點的高頻LOH提示為潛在抑癌基因，為了明確NKD2在胃癌發生髮展中是否具有抑癌基因作用，本課題擬通過對胃癌細胞株以及胃癌組織中的NKD2基因表達，基因編碼區突變分析、啟動子甲基化分析以及構建NKD2的真核表達載體，體外轉染胃癌細胞後研究其對胃癌細胞體外以及小鼠異種移植瘤的生長、凋亡、細胞周期以及遷移侵襲能力的影響。此外，有文獻報導NKD2基因參與Wnt信號通路的負性調控，我們將進一步分析NKD2基因與Wnt信號通路中重要功能蛋白質的相互作用。該課題按照預定實驗計畫順利實施並取得一系列進展，通過研究證實NKD2基因在胃癌細胞以及人胃癌組織表達明顯降低，該基因的表達降低並非為基因突變所致，而是與該基因啟動子區的高甲基化有關。將NKD2基因的真核表達載體轉染到胃癌細胞株後，明顯抑制了胃癌細胞的細胞周期進程，細胞阻滯於G2/M期。體外過表達NKD2明顯抑制了胃癌細胞的增殖、遷移與侵襲能力，抑制了裸鼠體內異種移植瘤的生長，但對胃癌細胞的凋亡影響不明顯。通過對胃癌細胞的提取蛋白的免疫共沉澱實驗證實，NKD2蛋白是與Wnt信號通路關鍵蛋白Dishevelled具有相互作用，參與了Wnt信號通路的負性調控。該項目實施期間培養了博士研究生5名，鍛鍊了課題組內青年科研人員，資助項目組人員與研究生出席國內外學術會議多人次。並在國際、國內學術刊物發表受本基金資助學術論文15篇。項目實施期間，申報胃癌發病機制與轉化套用相關的發明專利1項，國家著作權局計算機軟體著作權2項。獲得省部級科技獎項4項，獲得各種榮譽多項。
