《胃癌中TESTIN基因失活機制及功能的初步研究》是依託中山大學，由夏建川擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：胃癌中TESTIN基因失活機制及功能的初步研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：夏建川
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
在上一國家自然科學基金課題研究中，利用人類基因組計畫的新成果――單核苷酸多態性（SNP）遺傳資料庫，結合我們自己建立的高通量SNP晶片專利技術，對105例原發性胃癌組織中D7S486附近309個SNP位點進行了雜合性缺失檢測，發現TESTIN基因存在高頻率的雜合性缺失，而且，通過轉錄水平及翻譯水平的研究，發現在原發性胃癌組織中，TESTIN基因表達明顯下調，且與胃癌的低分化和預後差呈正相關，初步證實TESTIN基因是胃癌相關的抑癌基因；在此基礎上，設計了一條新穎的技術路線，進一步開展胃癌中TESTIN基因失活機制及功能的研究：包括在胃癌組織和胃癌細胞系中進行TESTIN基因的突變和甲基化檢測；TESTIN基因在胃癌細胞生長周期、侵襲和成瘤過程中的作用；以及探討該基因與其它基因和蛋白質的相互作用，進一步闡明TESTIN基因在胃癌發生髮展中的作用，為胃癌的臨床診斷、治療和預後判斷提供新的依據。
結題摘要
胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，前期研究中我們鑑定了雜合性丟失位點D7S486中包含的TESTIN基因，推測其可能是胃癌相關的抑癌基因。本研究項目通過對三個胃癌細胞系和5例胃癌標本中TESTIN基因外顯子序列的檢測，發現在所有細胞系和胃癌組織中，TESTIN基因第1、2、3和5號外顯子均未發現突變；在HGC27、SGC7901細胞系和2例胃癌組織中分別發現了以下突變：第221位GCC/GTC；第364位CGG/CGC；第364位CGC/CGC；第312位GAG/GGG。對30例原發性胃癌組織和3例胃癌細胞系進行甲基化檢測，發現有18例組織呈完全甲基化、4例呈部分甲基化、8例未甲基化，細胞系MGC803、HGC27中TESTIN啟動子區完全甲基化。我們的研究結果表明TESTIN基因的主要失活方式之一是啟動子甲基化。同時，我們構建了TESTIN重組腺病毒表達載體並包裝重組腺病毒，感染胃癌細胞系SGC7901和MKN45並對其一系列腫瘤生物學特性進行檢測。結果發現，TESTIN基因過表達可抑制胃癌細胞的增殖和克隆形成，抑制胃癌細胞由G1期進入S期，抑制胃癌細胞的體外侵襲和遷移能力。此外，我們將這兩個細胞系分別在裸鼠體內進行成瘤實驗，結果表明TESTIN基因能夠顯著抑制胃癌細胞在裸鼠體內的生長。通過表達譜晶片、免疫共沉澱及質譜分析發現了與TESTIN蛋白相互作用的Mena蛋白，現階段的研究結果表明TESTIN可能通過與Mena相互作用競爭性的抑制Mena與細胞偽足蛋白Lpd的結合，從而抑制由於Mena引起的胃癌細胞系的侵襲和遷移。同時，transwell實驗和對胃癌臨床標本分析結果表明，TESTIN對胃癌細胞遷移和侵襲的抑制作用是依賴於Mena實現的。我們的研究結果進一步證實了TESTIN基因潛在的腫瘤抑制作用，初步探討了TESTIN抑制胃癌轉移的作用機制，為深入研究其在胃癌發生髮展中的作用機制奠定了基礎。
