《肽聚糖識別蛋白（PGRPs）介導小菜蛾免疫的機理研究》是依託華南農業大學，由許小霞擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：肽聚糖識別蛋白(PGRPs)介導小菜蛾免疫的機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：許小霞
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
昆蟲免疫系統的的激活受Toll/Imd信號通路的調控，而肽聚糖識別蛋白（PGRPs）是開啟Toll/Imd信號通路的關鍵模式識別蛋白。本項目擬以小菜蛾為實驗材料，運用SSH文庫和RACE技術克隆小菜蛾體內的PGRPs基因，運用RNAi技術阻斷小菜蛾PGRPs基因的表達，從而使啟動小菜蛾免疫系統的Toll/Imd信號傳導途徑阻斷或減弱，使小菜蛾更易感病而死亡，以期為通過調控害蟲的免疫系統的開啟來控制害蟲奠定基礎。運用定量RT-PCR、Northern印跡等方法檢測PGRPs阻斷前後抗菌肽基因的表達譜，闡明PGRPs在小菜蛾抗菌肽信號傳導中的功能；採用SSH文庫篩選免疫的健康小菜蛾和RNAi抑制小菜蛾蟲體的抗菌肽cDNA序列，以期獲得小菜蛾體內新的抗菌肽基因。該項目運用了靶標特異性強的RNAi技術，避免了環境污染，為小菜蛾的綜合防治提供了一種新的手段，並為新的抗菌肽基因的篩選開闢新的思路。
結題摘要
1、 為了更好的挖掘小菜蛾體內的免疫基因相關基因，本實驗測定了小菜蛾的轉錄組，並結合本實驗室構建的SSH文庫，綜合篩選到的725條免疫相關Unigenes中，其中共獲得了8個PGRP的Unigenes。本研究利用RACE技術克隆得到5個PGRP的cDNA全長，包括4個S型和一個L型，分別命名為：PxPGRP-SA (EU399240)，PxPGRP-SB， PxPGRP-SD, PxPGRP-S2和PxPGRP-LC。 2、 為了更好探討小菜蛾PxPGRP的結構和功能。在原核細胞中表達了PxPGRP-SA，並製備了多克隆抗血清。免疫組化檢測表明PxPGRP的主要表達部位是其脂肪體。為了研究其功能，在SF9 細胞和果蠅S2細胞中表達了PxPGRP-SA，利用His-taq一步純化了重組的PxPGRP-SA。粘附實驗表明細胞重組的PxPGRP-SA對格蘭氏陽性菌具有較強的粘附結合功能，預示PxPGRP-SA對革蘭氏陽性菌具有重要的識別反應。 3、 利用製備的PxPGRP-SA蛋白和抗PxPGRP-SA血清分別注射小菜蛾，結果表明在注射PxPGRP-SA蛋白的血淋巴中的PPO活性明顯高於注射抗PxPGRP-SA血清的PPO活性；同時注射PxPGRP-SA蛋白的血淋巴中的細菌的存活率明顯低於注射抗PxPGRP-SA血清的血淋巴中的細菌存活率；RNAi阻斷了PxPGRP-SA的表達後的血淋巴的PPO活性也有所下降，結果表明PxPGRP-SA在啟動PPO活性過程中起著重要作用。 4、 本研究利用RNAi阻斷了PxPGRP-SA的表達，螢光定量PRC檢測表明，PxPGRP-SA表達沉默後，抗菌肽基因cecropin1，Cecropin2，defensin和Lysozyme1的表達明顯降低，而且，RNAi阻斷了PxPGRP-SA的表達後的血淋巴中的細菌存活率明顯升高。結果表明PxPGRP-SA在小菜蛾抗菌肽表達過程中起調控作用。進一步研究表明，PxPGRP-SA基因的沉默，提高了玫煙色棒束孢對小菜蛾的致病能力。 5、 通過以上研究，挖掘了8個小菜蛾PGRP的Unigenes，克隆了5 個小菜蛾PGRP的全長，明確了PxPGRP-SA在小菜蛾抗菌肽表達和酚氧化酶活性中起著重要功能；發表文章4篇，其中SCI文章一篇；投稿文章（SCI）3篇。
