《肝臟免疫調控蛋白LSECtin同配體的相互作用研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由吳可擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肝臟免疫調控蛋白LSECtin同配體的相互作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳可
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
新型肝臟免疫調控蛋白LSECtin可負調控活化的T細胞，在肝臟免疫耐受中發揮重要的作用，活化T細胞的CD44分子是其發揮功能的內源性配體，本項目擬從構象運動性的角度採用SDSL-EPR技術研究溶液中LSECtin/CD44的相互作用機制。通過構建一系列的半胱氨酸點突變體，經SDSL-EPR檢測首先獲得溶液中這些位點的構象運動性信息，繼而在結合鈣離子、甘露糖和GlcNAc等單糖後研究LSECtin-CRD結構域不同位點的構象運動性變化；在此基礎上檢測LSECtin同活化T細胞CD44結合過程中蛋白分子動態摺疊變化，位置取向，以及重要胺基酸位點構象運動性變化，最終獲得LSECtin/CD44相互作用的分子機制。鑒於LSECtin極具肝炎疾病治療的潛力，LSECtin/CD44相互作用的分子機制研究對於LSECtin的藥理功能研究具有重要的臨床價值和意義。
結題摘要
hLSECtin在肝臟免疫耐受調節中具有負調控活化T細胞的作用。hLSECtin/CD44受體-配體分子對是介導hLSECtin粘附活化T細胞的分子基礎。本項目套用SDSL-EPR技術檢測hLSECtin主要功能結構域CRD上不同位點的構象運動性特徵，研究了hLSECtin/CD44相互作用的分子機制。通過生物信息學分析，構建了hLSECtin-CRD單/雙Cys點突變蛋白模型；通過Tat標籤載體實現hLSECtin-CRD點突變蛋白的高效可溶性表達，並建立了高效可溶性表達膜蛋白的方法；通過改進CW-EPR距離計算軟體，合成雙自旋距離刻度分子標尺，在8-14 Å範圍建立了穩定的雙自旋距離刻度分子標尺及其距離刻度與校正的實驗方法；通過EPR波譜測量與分析，獲得了hLSECtin-CRD結構域在結合Ca2+、單糖以及CD44分子前後不同位點的構象運動性和距離變化規律。結合以上信息，獲得了hLSECtin蛋白在分子結合過程中部分構象變化特徵，揭示了hLSECtin 同CD44分子的相互作用的部分分子機制，為其肝臟免疫耐受調控功能提供了結構基礎，並可以為深入開展C型凝集素分子的功能研究提供基礎和新的技術手段。
