《肝細胞生長因子（HGF）調控結腸癌Mcl-1表達的分子機制》是依託吉林大學，由曾慶華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肝細胞生長因子(HGF)調控結腸癌Mcl-1表達的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：曾慶華
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
癌細胞轉移是癌症預後不良的重要原因。我們的前期工作證實了TGF-β信號傳導通路的表達異常與結直腸癌（CRC）發生、發展存在相關性（Science, 2009; Cancer Res, 2010）；同時證實HGF通過激活PI3K/AKT和MAPK/ERK傳導通路使癌細胞獲得抗失巢凋亡的能力；HGF激活傳統的Notch傳導通路促進腫瘤血管生成進而導致腫瘤惡化（Cancer Cell, 2005, JBCs, 2002）。我們的預實驗結果顯示HGF在誘導抗凋亡蛋白Mcl-1在結腸癌細胞中的表達受細胞內SMAD4存在狀況的制約。本項目擬運用SMAD4突變和野生型CRC細胞系通過各種分子生物學手段和方法干擾SMAD4表達，探索HGF在TGF-β/SMAD傳導通路變更的條件下調控Mc-1蛋白表達的機制及其在結直腸癌轉移過程中的作用，為臨床治療和延緩結直腸癌轉移提供新思路。
結題摘要
我們前期工作中發現HGF 在誘導抗凋亡蛋白 Mcl-1 在結腸癌細胞中 的表達受細胞內SMAD4存在狀況的制約。本項目旨在利用慢病毒轉染從建SMAD4 表達的SW620和HT-116 結腸癌細胞以及 “短髮夾RNA”敲除SMAD4 的DLD1 和HCT-15結腸癌細胞，探討HGF對Mcl-1表達是否受細胞內SMAD4存在的影響，並結合臨床病人標本和小鼠腫瘤模型進行驗證。本研究中，HGF對SMAD4缺失結腸癌細胞中Mcl-1表達的誘導作用明顯高於對SMAD4野生型的細胞；反之，HGF誘導Mcl-1在SMAD4 的重建結腸癌細胞中的表達明顯低於其SMAD4缺失的細胞， 證實結腸癌細胞中MCL-1的表達與SMAD4存在狀態有關；採用SMADs抑制劑SB431542阻斷SMAD4的表達進一步證實了上述結果； MTT法測定SMAD4重建與敲除對細胞增殖試驗的結果表明SMAD4存在狀態對結腸癌細胞的增殖沒有明顯影響；Matrigel腫瘤細胞侵潤實驗結果表明缺失SMAD4的結腸癌細胞對HGF誘導浸潤的細胞明顯多於SMAD4野生型的細胞。利用構建含有Mcl-1啟動子的螢光素酶報告基因載體對不同SMAD4背景的結腸癌細胞株測定HGF對相應Mcl‐1 基因啟動子活性的結果顯示SMAD4對Mcl-1基因表達有抑制作用。臨床結腸癌患者的血樣，癌組織，和癌旁組織，分別進行了生化和免疫組化研究結果顯示，HGF血漿濃度在中晚期結腸癌患者中明顯高於早期患者；免疫組化結果顯示Mcl-1在腫瘤組織中表達高於其在癌旁組織對表達；惡性腫瘤高於良性腫瘤；病人血漿HGF含量於其腫瘤的惡性程度成正相關。小鼠腫瘤實驗模型結果顯示SMAD敲除的結腸癌細胞成瘤率和生長速度明顯高於其對照組。小鼠肺轉移模型結果顯示SMAD4敲除的結腸癌細胞在小鼠肺中形成克隆的數目較SMAD4野生型的細胞明顯增多。本研究從分子水平闡明了HGF對抗凋亡蛋白Mcl-1的調控受細胞內SMAD4狀態影響，從而較新地揭示了結腸癌的發生和轉移機制，不僅為有效地控制結腸癌的轉移及治療提供實驗依據，二期為抗腫瘤藥物開發提供新的靶點。
