耐輻射球菌PprI-Rddr介導的DNA損傷回響途徑機制研究

《耐輻射球菌PprI-Rddr介導的DNA損傷回響途徑機制研究》是依託浙江大學，由王梁燕擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：耐輻射球菌PprI-Rddr介導的DNA損傷回響途徑機制研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：王梁燕
• 項目類別：面上項目

項目摘要

細菌中經典的DNA損傷回響系統是一種依賴於LexA和RecA蛋白的SOS途徑。最近在耐輻射球菌中發現了一條獨特的應急回響途徑，依賴於新型的DNA損傷回響修復開關PprI和新發現的底物蛋白Rddr。本項目擬通過RT-PCR和Western印跡等技術，研究PprI-Rddr途徑上游激活因素；運用質譜鑑定、蛋白修飾位點分析和點突變株構建等技術，研究PprI-Rddr途徑關鍵蛋白酶的活化方式；利用螢光定量PCR、EMSA和Northern雜交等技術，研究PprI等蛋白和所作用啟動子對下游基因的協調控制作用。通過本研究，旨在闡明以PprI-Rddr為中心的新型DNA損傷回響途徑作用機理，加深對微生物的環境脅迫適應性機制的認識，並為極端微生物資源的開發利用提供理論依據。

結題摘要

細菌中經典的DNA損傷回響系統是一種依賴於LexA和RecA蛋白的SOS途徑。最近在耐輻射球菌中發現了一條獨特的應急回響途徑，依賴於新型的DNA損傷回響修復開關PprI和新發現的底物蛋白Rddr。本項目通過蛋白表達純化、Western印跡、質譜鑑定、蛋白修飾位點分析、點突變株構建、EMSA、蛋白質結晶及分析等技術手段，最佳化了信號通路重要的蛋白表達和純化、分析了信號傳導途徑重要蛋白PprI和Rddr的體外生化活性、研究了PprI蛋白酶活性啟動和提高方法、建立了DNA-蛋白質特異性結合位點的新方法、探索了電離輻照對PprI蛋白翻譯後修飾的影響、研究了PprI重要位點突變對耐輻射球菌輻射抗性的影響、檢測了PprI蛋白的重要磷酸化位點突變對信號途徑活性的影響、分析了輻射抗性相關磷酸化位點突變對PprI體外活性的影響、探討了PprI蛋白通過與RNA polymerase等蛋白互作促進下游基因轉錄、並初步解析了PprI、Rddr及其複合物的晶體結構。通過本研究，初步闡明了以PprI-Rddr為中心的新型DNA損傷回響途徑作用機理，加深對微生物的環境脅迫適應性機制的認識，並為極端微生物資源的開發利用提供理論依據。