羧甲基殼聚糖對雪旺細胞的促增殖作用及調節機制

《羧甲基殼聚糖對雪旺細胞的促增殖作用及調節機制》是依託武漢大學，由賀斌擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：羧甲基殼聚糖對雪旺細胞的促增殖作用及調節機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：賀斌
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

通過組織工程技術運用雪旺細胞修復損傷脊髓與周圍神經是目前頗具前景的方法。在先前的研究中我們發現羧甲基殼聚糖對體外培養雪旺細胞增殖及NGF分泌具有促進作用，且MEK/ERK、PI3K/Akt及Wnt/β-catenin信號通路在該效應中起重要作用。本研究中，我們將進一步觀察羧甲基殼聚糖對體外培養雪旺細胞細胞周期進程、細胞周期蛋白表達、細胞凋亡及神經營養因子分泌的影響；並檢測羧甲基殼聚糖對雪旺細胞內PKA、PKC及NF-κB信號轉導通路激活的影響，及上述信號通路在羧甲基殼聚糖促雪旺細胞增殖與分泌中的作用進行研究，並研究其可能作用機制。本課題的實施可為羧甲基殼聚糖激活雪旺細胞在脊髓及周圍神經損傷修復的研究與臨床套用奠定一定的理論與實驗基礎。

結題摘要

前期研究初步證實CMCS可以促進SCs增殖，本課題旨在運用生物信息學、蛋白質生物化學、細胞生物學等方法與技術進一步探討並證實CMCS對SCs的增殖促進作用及氧化應激誘導凋亡的保護作用，並對信號通路PKA、PKC、NF-κB、線粒體途徑參與上述效應的機制進行初步研究。本課題首先通過體外分離大鼠坐骨神經、培養並純化SCs，S-100免疫螢光染色鑑定SCs。通過不同濃度CMCS作用SCs，套用MTT、CCK-8及BrdU染色法檢測CMCS對SCs增殖的影響，結果證實了CMCS對SCs的促增殖作用。螢光定量PCR及蛋白質生化檢測證實CMCS可促進SCs內神經營養因子NGF及CNTF的表達。H2O2誘導構建SCs凋亡模型並加入CMCS共培養，通過流式細胞技術及Hoechst33342染色檢測凋亡情況，結果表明CMCS可抑制H2O2誘導SCs凋亡，並發現CMCS通過抑制線粒體凋亡途徑發揮上述效應。另外本研究還證實CMCS可增加SCs內cAMP含量、增強PKA活性、增加CREB表達、激活p65/NF-κB。本課題套用信號通路抑制劑H-89、Staurosporine及PDTC分別阻斷PKA、PKC及NF-κB通路，進一步闡明上述通路在CMCS促SCs增殖效應中的機制。綜上所述，本課題證實了CMCS具有調節SCs增殖分泌及保護SCs凋亡的生物學效應，同時為CMCS套用於周圍神經再生提供了重要的理論與實驗依據。 本課題共發表論文12篇，其中SCI論文4篇，中華級論文3篇，統計源核心期刊論文5篇；課題實施期間培養博士研究生1名，碩士研究生1名（目前為在讀博士）；項目投入經費23萬元，支出21.15萬元，各項支出基本與預算相符。剩餘經費1.85萬元，剩餘經費計畫用於本項目研究後續支出。