《缺氧誘導朊蛋白在胃癌中的高表達及可能機制》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由梁潔擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：缺氧誘導朊蛋白在胃癌中的高表達及可能機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：梁潔
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
朊蛋白（PrPc）是朊病毒在細胞內的正常形式，功能尚不清楚。在國科金的資助下，本課題組在國際上率先發現PrPc與胃癌惡性表型相關。但是，為什麼應該高表達在神經系統的PrPc在胃癌中高表達？神經系統的研究發現PrPc在腦組織缺氧區域表達增高，發揮抗氧化、保護神經元功能。而缺氧是胃癌等實體腫瘤的常見現象，胃癌中朊蛋白的高表達是否也與缺氧有關？本課題組前期實驗提示缺氧可以誘導胃癌細胞中PrPc表達增高，且與MERK/Erk通路相關。本項目將在上述工作的基礎上，進一步通過實體組織標本證實缺氧誘導胃癌組織中PrPc表達的變化，利用高通量的方法篩選其中的效應分子及信號轉導通路，最後通過干預手段研究缺氧誘導PrPc表達變化後對胃癌惡性表型的影響。該項目是本課題組既往對PrPc與胃癌相關研究的深入，有助於進一步揭示PrPc的生物學功能，明確PrPc在胃癌發生髮展中的分子機理，對於理解胃癌發生具有重要意義。
結題摘要
缺氧孵箱或CoCl2進行缺氧誘導後，通過Western Blotting和RT-PCR方法檢測發現胃癌細胞系SGC7901、AGS、MKN28中PrPc的 mRNA和蛋白表達水平均增加。免疫螢光檢測不同缺氧時間誘導朊蛋白的表達，提示缺氧誘導朊蛋白表達呈慢性增高趨勢，8h時達到最高峰，24h後接近常氧表達量。生物信息學及前期報導提示缺氧可以誘導含有HSE啟動子區域的朊蛋白轉錄活性增強，為了研究本實驗中缺氧誘導朊蛋白表達改變的機制，我們設計了含有HSE的朊蛋白啟動子載體和不含有HSE朊蛋白啟動子載體，分別給予缺氧和常氧誘導後，用雙螢光報告系統檢測其轉錄活性。 MKN28細胞共轉染pGL3-PRNP （-756~+96） 或PGL3-PRNP （-2253~+289）後，孵育24h再給予缺氧處理，發現缺氧誘導後朊蛋白啟動子活性比常氧時啟動子活性增強（p＜0.05），缺氧處理時含有HSE的朊蛋白啟動子pGL3-PRNP （-2253~+289）轉錄激活活性是不含有HSE的朊蛋白啟動子pGL3-PRNP （-756~+96）及空載體pGL3對照的4.3倍。2D和基因晶片篩選缺氧及常氧條件下轉染PrPc細胞系差異表分子，進一步Western Blot及RT-PCR驗證發現，缺氧條件下朊蛋白的高表達可以被MERK/ERK特性應抑制劑PD98059減弱，但是p38 MAPK特異性抑制劑SB203580和JNK特異性抑制劑SP600125對缺氧引起的朊蛋白表達增高沒有影響。最後，研究發現缺氧誘導PrPc-siRNA轉染的胃癌細胞可以增加ADR、VCR、VP-16、5-FU和CDDP等化療藥物的敏感性，說明缺氧誘導PrPc高表達後影響胃癌細胞的惡性表型。
