《缺氧對急性髓系白血病DNA甲基羥化酶TET2的影響及機制研究》是依託湖南師範大學，由劉小柳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：缺氧對急性髓系白血病DNA甲基羥化酶TET2的影響及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉小柳
- 依託單位：湖南師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
缺氧參與表觀修飾調節，甚至有學者認為表觀修飾調節在低氧反應中發揮關鍵作用，但在急性髓系白血病中相關機制並不清楚。本課題以人急性髓系白血病AML CD34+原代細胞及細胞系KG1a為研究對象，從整體基因組甲基化水平及具體基因甲基化態勢兩方面觀察缺氧對白血病細胞甲基化表觀修飾的影響；並採用基因重組技術，從缺氧誘導因子HIF-1α過表達及表達抑制兩方面研究HIF-1α對白血病細胞內DNA羥甲基化酶TET2 表達及功能的調節，進一步採用蛋白與DNA結合試驗及轉錄活性檢測對相關調節機制進行探討，以明確缺氧對白血病細胞基因甲基化的作用及潛在機制，為臨床白血病診斷及治療領域相關靶向分子的尋找提供實驗依據。
結題摘要
缺氧參與白血病的表觀修飾調節。本課題以人急性髓系白血病細胞系KG-1及AML 患者骨髓單個核細胞為研究對象，首先通過CCK-8實驗、LDH測定及Annexin V-FITC/PI雙標流式法觀察不同氧濃度及缺氧時間對AML細胞增殖及凋亡的影響，結果發現：缺氧促進AML細胞增殖、抑制凋亡。隨後通過構建HIF-1α過表達質粒及採用HIF-1α抑制劑YC-1，從HIF-1α過表達及表達抑制兩方面研究其對白血病細胞內DNA羥甲基化酶TET2 表達的影響及功能的調節，結果發現：缺氧通過上調轉錄因子 HIF-1α的表達進而促進TET2表達、基因組去甲基化（5-hmC水平）和癌基因P15去甲基化。進一步採用染色質免疫共沉澱及螢光素酶報告基因實驗發現HIF-1α通過與TET2基因啟動子區缺氧反應原件結合而增強其轉錄活性。本研究發現TET2為HIF-1α調節的潛在靶基因，並且缺氧可以通過HIF-1α對TET2的表達進行調控，進而影響下游靶基因的甲基化及表達，在白血病發生及進展過程中發揮分子生物學作用。本研究對AML中缺氧代謝與基因表觀調節的關係進行了初步探討，為急性白血病等血液系統惡性腫瘤的診治研究提供了新的思路與實驗依據。項目資助發表SCI論文1篇，待發表SCI論文1篇。培養碩士生2名。
