《縫隙連線蛋白磷酸化在腦血管痙攣中作用的研究》是依託南昌大學，由洪濤擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：縫隙連線蛋白磷酸化在腦血管痙攣中作用的研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：洪濤
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛛網膜下腔出血後腦血管痙攣（CVS）一直是腦血管疾病研究中的難點和熱點。內皮素-1（ET-1）被公認為是CVS的關鍵因素。前期我們創新地開展了縫隙連線（GJ）在CVS中作用的研究，表明GJ參與了ET-1引起的CVS，其機制可能是ET-1通過調節GJ蛋白磷酸化影響細胞間信號傳導的通透性和傳導性，繼而引起血管收縮與舒張信號平衡的紊亂，導致CVS的發生。本課題擬採用質譜、RNA干擾、基因定點突變等技術從以下3個方面開展研究：（1）在ET-1誘導的CVS中，GJ蛋白磷酸化及其位點的測定，進而研製針對GJ蛋白特異性磷酸化位點的抗體； （2）套用這些抗體探討ET-1引起 GJ蛋白磷酸化的各種信號轉導機制；（3）改變GJ蛋白磷酸化水平對ET-1引起CVS的影響。本課題為我們長期致力於CVS中細胞間信號轉導機制研究的深入和延續，通過本課題的深入研究，可能對探索CVS的形成機理和治療方法等方面提供新的思路。
結題摘要
腦血管痙攣是神經科學急待解決的難題，其發病機制未明，治療也無特效方法。我們前期研究表明縫隙連線參與腦血管痙攣的形成，其機制可能是通過調節縫隙連線蛋白磷酸化影響細胞間信號傳導的通透性和傳導性，繼而引起血管收縮與舒張信號平衡的紊亂，導致腦血管痙攣的發生。本課題在前期研究的基礎上，對縫隙連線磷酸化參與腦血管痙攣的機理進行深入探討，研究內容包括：①在腦血管痙攣模型中，通過質譜分析縫隙連線蛋白磷酸化及其位點的測定，進而研製特異性磷酸化位點的抗體； ②探討縫隙連線蛋白磷酸化的各種信號轉導機制；③改變縫隙連線蛋白磷酸化水平對腦血管痙攣的影響。本研究得出以下結果：①通過質譜技術成功鑑定出Cx43的4個磷酸化位點；並利用蛋白印跡技術發現腦血管痙攣中Cx43 S368位點磷酸化水平明顯升高；②Cx43 S368位點磷酸化與腦血管痙攣密切相關，且磷酸化信號PKC途徑可能為腦血管痙攣中Cx43 S368位點的主要磷酸化途徑；③成功構建了表達Cx43 S368位點突變的慢病毒載體，並達到理想的組織水平感染效率；④通過慢病毒感染的方法抑制Cx43蛋白Ser368位點磷酸化水平可在體內外模型中加劇腦血管痙攣的程度，並且與磷酸化導致的細胞間通訊功能改變密切相關。以上結果揭示縫隙連線磷酸化是其參與腦血管痙攣的重要病理形式，特異性降低磷酸化水平能夠對腦血管痙攣的病理改變產生明確影響，進一步研究升高磷酸化水平及其作用機制，可能是一種治療和預防腦血管痙攣的新靶點。
