《結直腸癌新候選抑癌基因TRPM4的作用及分子機制研究》是依託浙江大學，由何超擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：結直腸癌新候選抑癌基因TRPM4的作用及分子機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：何超
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
結直腸癌發病率高，預後差，主要原因在於病因和發病機理仍未完全闡明。我們前期研究發現瞬時受體電位M通道家族成員TRPM4在結直腸癌組織中的表達較正常腸黏膜顯著下降或沉默，並與結直腸癌患者的預後密切相關。TRPM4基因轉染後能夠明顯增加腸癌細胞HT29中的胞漿鈣離子濃度並顯著抑制腫瘤的生長和促進腫瘤細胞凋亡。TRPM4是一種Ca2+激活的非選擇性陽離子（如Na+、K+）通道, 其本身不能直接影響Ca2+通透性，但可通過改變膜電位值間接影響Ca2+內流，在細胞生理活動中起重要作用。本項目將檢測TRPM4在結直腸癌組織中的表達及其調控機制，並通過體內外實驗研究TRPM4在結直腸癌中所起的生物學作用及其分子機制，尤其是TRPM4是否通過調控鈣離子信號通路影響細胞死亡方面發揮重要作用，闡明TRPM4在結直腸癌發生髮展中的作用和機制，為基於TRPM4的結直腸癌診斷和治療提供科學依據。
結題摘要
TRPM4是一種非選擇性陽離子通道，在調節細胞內鈣離子濃度方面起重要作用，已報導在多種腫瘤中異常表達並與腫瘤的遷移相關。本課題我們研究TRPM4在結直腸癌轉移中的所起的作用，RT-PCR和MSP以及免疫組化分析TRPM4的表達及甲基化狀態，TRPM4表達質粒轉染、增殖和遷移檢測，鈣離子濃度和免疫螢光等檢測相關的信號通路。我們的實驗結果表明在大多數結直腸癌組織和腸癌細胞系中TRPM4表達降低甚至沉默，且在這些異常表達的腫瘤細胞及組織中檢測到TRPM4基因啟動子處的高度甲基化。TRPM4蛋白的表達和腫瘤的分期（p＜0.001）、淋巴結轉移（p=0.008）、遠處轉移（p=0.025）和侵襲（p＜0.001）顯著相關。TRPM4陽性表達的患者術後生存率明顯高於陰性表達者。腸癌細胞株轉染TRPM4後，通過體內外實驗發現TRPM4能顯著抑制腫瘤細胞的增殖、遷移，並引起細胞骨架重構。流式細胞術和Western Blot結果顯示TRPM4顯著促進鈣離子內流並激活鈣蛋白酶（calpain），介導焦點粘附激酶FAK的蛋白水解並抑制其磷酸化，從而抑制下游PI3K/AKT/mTOR通路來抑制腫瘤細胞的遷移，TRPM4同時造成多種遷移相關蛋白的表達改變。這些抑制作用可被鈣蛋白酶抑制劑解除，TRPM4有希望作為一種腫瘤標誌物和潛在治療靶點套用於結直腸癌的診斷和轉移治療。
