組織工程聯合反義核酸技術重建尿道的實驗研究

《組織工程聯合反義核酸技術重建尿道的實驗研究》是依託上海交通大學，由李超擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：組織工程聯合反義核酸技術重建尿道的實驗研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：李超
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

口腔黏膜是目前國內外套用最廣的尿道重建材料，但存在供區損傷大，組織來源有限等缺點。套用幹細胞組織工程技術進行尿道重建是當前研究的熱點之一，但因其調控、誘導困難，短期內尚無法套用於臨床，且其亦無法避免修復段尿道瘢痕的生成。針對上述問題，本項目擬聯合套用組織工程和反義核酸技術，以口腔黏膜細胞和成纖維細胞為種子細胞，以膀胱黏膜下層脫細胞基質（BAMG）為支架，構建更接近生理結構的組織工程口腔黏膜；並在此基礎上，將反義轉化生長因子-β1（TGF-β1）寡核苷酸在脂質體介導下轉染成纖維細胞，減少其I型膠原的過度合成與分泌，使重建的組織工程尿道既具有促進癒合的能力，又具備抑制瘢痕形成的能力，以期探尋尿道重建的新策略，降低尿道狹窄的復發率。

結題摘要

本研究致力於聯合套用組織工程和RNA干擾技術，進行尿道重建的探索。課題組成功製備了兔膀胱黏膜下層脫細胞基質，顯示其呈疏鬆的薄膜狀，隨機取材HE染色，光鏡觀察筋膜為疏鬆的膠原成分，未見有細胞存在，脫細胞效果良好，可作為尿道重建的支架材料。課題組成功進行了兔口腔黏膜細胞和成纖維細胞的培養和鑑定，研究結果顯示口腔黏膜細胞可傳代至7－8代，呈現典型的“鋪路石”狀，細胞大小均一；傳至第2代，細胞總量可達到8.01×106，此細胞數量可滿足組織工程技術需要。成纖維細胞培養生長良好，呈梭形，約3天左右傳代一次。根據Genbank中TGF-β1基因序列,設計3對TGF-β1-siRNA序列, 分別轉染兔成纖維細胞，通過Q-PCR，篩選出干擾效果最佳的siRNA。把干擾效果最佳的siRNA，重新轉染兔成纖維細胞，行ELISA檢測觀察I型膠原蛋白變化情況。研究結果顯示siRNA可通過干擾TGF-β1的表達抑制成纖維細胞I型膠原蛋白的分泌，從而抑制瘢痕生成，為尿道瘢痕的基因治療提供了理論依據。然後課題組以口腔黏膜細胞和轉染後成纖維細胞為種子細胞，以膀胱黏膜下層脫細胞基質為支架，構建出更接近生理結構的組織工程口腔黏膜，通過 HE染色、掃描電鏡對所構建的組織進行評價，結果顯示口腔黏膜細胞和轉染後成纖維細胞在支架上生長良好，複合效果良好。我們套用此組織工程材料來進行尿道重建並設立對照組進行研究對比。研究結果顯示聯合套用口腔黏膜細胞和siRNA轉染的成纖維細胞進行尿道重建，尿道管腔通暢，瘢痕生成明顯減少，修復處毛細血管生成明顯增多，修復效果明顯優於對照組。現中文論著《TGF-β1表達對成纖維細胞膠原分泌影響的實驗研究》已在《現代泌尿外科雜誌》2012年9月發表；英文論著《Preliminary experimental study of urethral reconstruction with tissue engineering and RNA interference techniques》投稿《Asian Journal of Andrology》（IF：1.521），已接受；英文論著《Urethral reconstruction with tissue engineering and RNA interference techniques》投稿《UROLOGY》，修稿中，待發表。