組織培養（組織培養物）

組織培養是將生物的部分組織從本體分離而進行培養。該詞也指由適當裂 解的組織得到的單個細胞群體的保存或培養。也稱細胞培養(coal culture) （2）被保存或培養的任何細胞群體。

基本介紹

• 中文名：組織培養（組織培養物）
• 所屬學科：微生物學
• 類型：微生物學術語

套用

組織(細胞)培養廣泛用於病毒培養、癌的研究、免 疫學和毒理學等方面，也用於培養某些細菌(例如衣原體屬Chlamydia)，立克次氏體屬（ Ricke6tsia）。組織培養要在無菌條件下操作。 在單層（mpnolayCr）培養中，單個的（非聚集的）細胞群體生長在合適的表面上，形成匯合層厚度為一 個WACSo肉跟觀察時，單層似乎是一層半透明膜。原始細胞懸液可以來自任何一種動物組織—包括人和其他靈長類動物，也常常用腎、瘤和胚組織.

培養製備

培養容器

培養容器包括醫用平皿，洛克斯瓶，試管和萊頓瓶等。大部分容器是由中性ph的玻璃製作的，但也有採用某些塑膠(例如聚藝乙烯)的。

培養基

培養基(medium). (1)生長培養基(growthmedium)(例如Eagle培養基)可供細胞生長和分裂。基本組成成分是平衡鹽溶液，並加有葡萄塘，合適的胺基酸，維生素以及血清和(或〕乳清蛋白水解液如果出現污染，通常加抗生素。但連續加抑菌劑是不好的。應.u定期在無杭生素培養基上進行移植。以便檢查污染)。生長培養基中一也加入pH指示劑(如酚紅)和緩衝系統(例如碳酸氫鹽，N-乙經乙基呱嗦_N_2一乙烷磺酸)。(2)維持培養基(maintenaee medium)用來保持細胞群體的力私特性，同時使生長和分裂限制到最小限度。

單層培養物的製備

將選好的組織切成碎片，用30-330C的磷酸鹽緩衝生理鹽水(PB5)沖洗數次，然後放入含胰蛋白酶（D.D5-0.1%WfV）的PBS液中進行捎化(在30一”0c下，機械攪拌20--3D分鐘〕(胰蛋白酶減弱細胞間的結合，過度消化將損傷細胞)。棄去棍濁韻上清液(含有被損傷的細胞)。然後將組織碎片置於新鮮白酶溶液中再次消化。將上清濃(含有單個的細胞和聚體小塊)離心（soo-1D）a轉/分.5分鐘)並將細胞沉澱物重新懸浮於生長培養基中。確定細胞濃度，並將懸浮液用生長培養基稀釋成約每毫升含1個細胞，再把足以形成一淺層的懸浮液加到培養容器中。例如，一個4盎司的醫用平皿需用約15毫升懸浮液。培養期間哺乳動物細胞為37°C，細胞附著在培養容器內表面，通過生長和分裂，在幾天、一周或更長時間內形成匯合的單層醫用平皿培養在其側而上，試管或橫切面為圓形的瓶子則焙養在一個轉軸裝置接近水平位置上。容器繞長軸旋轉每分鐘不到一轉的速度，使得單層圍繞容器內壁發育而成相連的帶狀物。經過培養，動物細胞一般變為紡錘形或多角形。

傳代(subculture)a首先使細胞脫散(即從生長表面分離)，用脫散劑（例如含維爾烯ersen司。2-），45.0%的胰蛋白酶0.1%的PBS處理單層1一2分鐘，傾出脫散劑以後，將分散的細胞重新懸浮於新鮮的生長培養基中。這種細胞懸浮掖(在合適的細胞濃度下)可用來製備新鮮培養物。在冰凍等條件下，細胞能保存較長時間。

轉化(transformation) q在傳代一定次數以後，細胞或者逐漸死亡，鹹者發育成確立細胞株(establishedcell lin帥。確立細胞株的細胞都是異倍休。培養出的細胞的特徵可用免疫學方祛、或由檢查細胞的核型來定，後者涉及到把有絲分裂〔例如用秋水仙素處理)阻止在中期階段並檢查染色體。