測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（petrofhausser）細菌計數板。
基本介紹
- 中文名：細菌計數板
- 形狀：帶刻線的玻璃板
方法分類,區別,使用方法,
方法分類
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（petrofhausser）細菌計數板。
區別
兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區，計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.02mm，所以每個計數區的體積為0.02mm3，每個小方格的體積為1/20000mm3。使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。已知：1cm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3所以：1cm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/20000mm3=2×107個小方格，即係數k=2×107。因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（n）×係數（k）×菌液稀釋倍數（d）5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重複計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（n），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗乾淨，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞格線刻度。洗淨後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
使用方法
1、準備
準備計數時，磨光的表面小心地用擦鏡紙擦乾淨。蓋玻片也要擦乾淨。
2、蓋上蓋玻片
在需要蓋的周邊區域需要用蒸餾水弄的微濕然後蓋玻片要慢慢的從計數板的前端推入，直到蓋玻片的前端邊緣與計數板的劃格子的區域處於同位。
3、注意：蓋玻片是很容易壞掉的！
在外部支持和蓋玻片之間的干擾線（牛頓環）的組成顯示了蓋玻片的準確位置。
1、取一個良好混合型的吸管並且放置一些初期的幾滴液體。把吸管的外部擦乾然後保持吸管一定的角度直到小滴液體被吸管尖端吸上去。然後這滴液體被放置在蓋玻片和計數板之間。由於蓋玻片和計數板之間的毛細管現象作用的結果，兩個平面之間的縫隙被灌滿。在溶液要滿出計數板截面的邊緣之前，馬上移走吸管的尖端。如果有可見氣泡或者液體已經滿出邊緣並且進入其他的溝里，那么計數板就要擦乾淨並且重新加樣。
2、計數，裝載好的計數板被放置在顯微鏡台上然後計數格在低倍鏡焦距中顯示。高倍物鏡要非常小心的操作，因為計數板比常規的要更厚。如果你不小心的話，會導致計數板或者物鏡鏡頭的損傷。
3、如果可能的話，在作血細胞計數的時候使用機械平台的顯微鏡。顯微鏡的照明是重要的，太亮了會影響劃格線的觀察。光可以通過虹膜光圈減弱直到劃得格子在背景中再次清晰可見。細胞/質粒的計數應該充分稀釋到他們不再互相重疊，並且均勻的分配。要完成計數檢測需要擴大到期望的可見的細胞/質粒。細胞數量的計算推薦計數100方格作為排除少量的結果。計數格在超過劃線區域使用時需要均勻的分配，並且這個通過藉由三倍之數決定的方格支架在進入區段之內。
4、計數完100方格後總數除100（計數的方格數），來得到每格的平均值。乘稀釋度，除1/4000（每個小方格的立方容積1/20 x 1/20 x 1/10 – 1/4000mm3）。這次計算得到的數字是原非稀釋流質的每立方毫米的細胞數量。
