細胞生長曲線

細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之後，經過短暫的懸浮然後貼壁，隨後度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。在細胞達到飽和密度後，停止生長，進入平頂期，然後退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平台狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/mL)對培養時間(h或d)作圖，即得生長曲線。

基本介紹

• 中文名：細胞生長曲線
• 作用：測定細胞絕對生長數
• 屬性：培養細胞生物學特性的基本參數
• 領域：生物

計數法

1．取生長良好接近匯合的細胞，用胰酶消化，用新培養基製成細胞懸液後計數(見四、細胞傳代培養的實驗步驟)。如是非粘壁細胞，則離心棄舊培養基後，換上一定量的新鮮培養基然後製成細胞懸液計數。

2．根據細胞計數結果按每個小方瓶5×104/mL作傳代培養接種細胞，共接種21瓶細胞。

3．24 h後開始計數細胞，以後每隔24 h計數一次，每次取3瓶細胞，分別進行計數。計算平均值。連續計數7 d。

4．根據細胞計數結果，以單位細胞數(細胞數/mL)為縱坐標，以時間為橫坐標繪製生長曲線。

MTT法

1．製備1 mL細胞懸液。空白對照以1 mL培養基代替細胞懸液。加入0．1 mL MTT於37℃孵育4 h。使MTT還原為藍紫色甲月贊結晶。

2．加1 mL DTW脫色液，37℃至少靜置30 min(甚至過夜)，使甲質顆粒充分溶解。

3．吸取200 μL該溶解液至96孔板孔中，在酶標儀上讀取OD值，檢測波長570 nm，參考波長630 nm。

4．每隔24 h測量一個點，每個點為3個平行樣品的平均值。