《細胞內抗體敲除MHC-I抗原用於胰島細胞移植的研究》是依託山東大學，由劉子棟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：細胞內抗體敲除MHC-I抗原用於胰島細胞移植的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉子棟
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
排斥反應是制約胰島細胞移植臨床套用的主要原因，MHC－I抗原是排斥反應的主要攻擊靶點。細胞內抗體敲除MHC－I在胰島細胞上的表達，能否有效降低胰島細胞移植排斥反應，國內外均無研究。本實驗採用新的細胞內抗體技術，構建編碼抗MHC-I細胞內抗體的腺伴病毒載體，課題組前期已製備了該載體，利用該載體敲除人內皮細胞表面MHC-I，成功阻斷其MHC-I抗原的表達；實驗擬用該載體轉染人和恆河猴胰島細胞，產生胞內抗體特異性阻斷MHC-I 抗原在細胞表面的表達；體外將處理後的胰島細胞與異體淋巴細胞共培養，觀察胰島細胞活性和免疫源性。體內實驗：將處理後的恆河猴胰島細胞通過恆河猴糖尿病模型的門靜脈注入，監測移植後的血糖、C肽和免疫相關指標，觀察移植效果和排斥反應情況。為胞內抗體技術用於胰島細胞移植提供理論依據，為胞內抗體敲除MHC-I抗原的胰島細胞移植治療糖尿病奠定方法學基礎。
結題摘要
排斥反應是制約胰島細胞移植臨床套用的主要原因之一，MHC－I 抗原是排斥反應的主要攻擊靶點。套用細胞內抗體技術敲除MHC－I 在胰島細胞上的表達，探索敲除胰島細胞MHC-I表達抑制免疫移植排斥反應的效果，提高胰島細胞移植成功率，為此進行了下列實驗研究，並取得初步結果。 1、利用分子生物學技術，成功構建了MHC-I胞內抗體重組腺相關病毒載體，並進行體外實驗，驗證了其能夠敲除細胞表面MHC-I的作用。 2、胰島分離純化依然是制約胰島移植的一個重要方面，利用大鼠實驗摸索了穩定的分離、純化胰島細胞的方法，在體外對其進行活性鑑定，並進行了門靜脈注射胰島細胞的實驗。實驗中發現：①門靜脈注射胰島細胞會出現血栓形成、感染等導致動物死亡的併發症；②鏈脲佐菌素對實驗動物的肝腎功能有明顯的損害作用，建議套用谷胱甘肽預防藥物的肝腎損害，提高造模的成功率。 3、為了提高胰島細胞移植成功率，進行了門靜脈輸注供者骨髓細胞誘導免疫耐受方面的實驗，結果顯示：通過短期使用雷帕黴素聯合供者骨髓細胞輸注，發現受者大鼠胸腺、脾臟、淋巴結、肝臟中存在供體骨髓細胞嵌合性混合狀態的現象，顯示能夠誘導出受者大鼠對移植胰島的免疫低反應性，有可能作為胰島移植的免疫抑制方法。 4、利用鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）成功誘導了穩定的恆河猴糖尿病模型。由於STZ強氧化作用引起腎毒性和肝毒性，與其劑量密切相關，實驗驗證了以50mg/kg的STZ構建的恆河猴糖尿病模型穩定，肝腎功能損害小，死亡率低，成模率高。 5、將分離的供者胰島細胞與已構建的MHC-I胞內抗體重組腺相關病毒載體共培養5小時候後，經門靜脈輸入受者恆河猴（恆河猴糖尿病模型）體內，術後觀察到：①外周血CD4/CD8比值降低，B細胞、單核細胞減少；②免疫組化顯示移植的胰島細胞MHC-I表達減少；③受者恆河猴血糖降低、C肽升高；④鏈脲佐菌素對恆河猴肝腎功能有損害作用。實驗提示該細胞內抗體重組腺相關病毒可成功減少胰島細胞MHC-I的表達，減緩了移植後的免疫排斥反應，提高了胰島細胞移植的成功率。
