《端粒酶基因阻抑椎間盤退變的體內外研究》是依託南昌大學，由殷明擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：端粒酶基因阻抑椎間盤退變的體內外研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：殷明
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
椎間盤退變在臨床上十分常見，然而目前還沒有延緩或者阻抑椎間盤退變的方法。隨著椎間盤退變發生機制的深入研究，基因治療作為一種新的治療方法，從分子水平阻止或延緩椎間盤退變將成為可能。本研究利用人端粒酶催化亞單位基因（hTERT）表達水平對端粒酶的活性起關鍵作用,將外源性hTERT 基因導入細胞可誘導端粒酶活性,進而延長細胞壽命；結合四環素調控系統具有快速誘導表達及低毒性的優點,將構建的質粒Adeno-X-hTERTtet-off體內轉染退變椎間盤的髓核組織,以獲得在活體動物髓核組織內tet-off調控外源性hTERT基因的表達規律和hTERT阻抑椎間盤退變情況，通過生化檢測與組織學檢查方法觀察髓核組織中端粒酶活性的表達程度，髓核細胞壽命以及膠原蛋白Ⅱ和蛋白多糖等細胞外基質含量的變化。為hTERT基因有效而安全地治療椎間盤退變疾病提供理論依據。
結題摘要
椎間盤退變引起的一系列脊柱退行性疾病及其繼發病變在臨床上十分常見，臨床中應在椎間盤退變的早期對其進行干預，阻止椎間盤進一步退變。目前研究表明:髓核內蛋白多糖含量的減少是椎間盤退變的共同特徵,即蛋白多糖合成與分解的平衡失調可能是引起椎間盤退變的關鍵病理生理改變，因此對椎間盤病理生理和分子水平改變的研究為早期椎間盤退變的治療提供了理論依據。隨著椎間盤退變發生機制的深入研究，基因治療作為一種新的治療方法，從分子水平阻止或延緩椎間盤退變提供了可能。因此本研究將hTERT基因的腺病毒轉染髓核組織,對端粒酶基因治療椎間盤退變體內實驗進行探索,將構建的質粒pAdeno-X-hTERT轉染退變椎間盤的髓核組織,獲得在活體動物髓核組織內外源性hTERT基因阻抑椎間盤退變的結果，為hTERT基因重組腺病毒載體有效而安全地治療椎間盤退變疾病提供理論依據。 研究內容：1 構建人端粒酶催化亞單位基因表達的腺病毒；2 hTERT基因阻抑椎間盤衰老變化的體外實驗；3 構建兔椎間盤退變模型，確定能夠構建不同程度的椎間盤退變模型；4 hTERT基因阻抑椎間盤退變的體內作用。 重要結果：1 成果構建了hTERT-AD腺病毒，為端粒酶實驗研究提供了來源；2 在CT引導下成功構建針刺椎間盤退變模型，為椎間盤退變的基礎研究提供了良好的動物模型；3 證實了hTERT-AD體外轉染髓核細胞後能夠阻抑椎間盤的衰老，延長髓核細胞壽命，延長壽命的髓核細胞有分泌細胞外基質的功能；4 證實了hTERT-AD能夠在兔退變椎間盤髓核內阻抑椎間盤的退變，在兔子體內能夠延長髓核細胞壽命，甚至有部分恢復椎間盤退變。 科學意義：1、在體外實驗中證實了hTERT能阻抑椎間盤細胞自然退變，能夠延緩椎間盤細胞衰老，並保持正常椎間盤細胞的分泌功能，為椎間盤退變的基礎研究提供了良好的實驗依據；2、在針刺椎間盤退變模型中，證實了hTERT能阻抑椎間盤退變並有部分退變的椎間盤得到一定恢復，為端粒酶阻抑椎間盤退變提供了實驗依據，並為椎間盤退變基因治療提供了理論依據。
