《禽呼腸孤病毒感染誘導細胞自噬的分子機理研究》是依託揚州大學，由吳艷濤擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：禽呼腸孤病毒感染誘導細胞自噬的分子機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳艷濤
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
禽呼腸孤病毒（ARV）感染可以引起多種禽類的重要疾病。本項目在前期發現ARV GX/2010/1感染致Vero細胞和雞胚成纖維細胞自噬、證明PI3K/Akt/mTOR通路與細胞自噬有關的基礎上，將進一步研究ARV誘導細胞自噬的分子機理，為防控ARV感染提供新依據。通過構建ARV σC蛋白和μNS蛋白的表達質粒和細胞系，觀察病毒蛋白在細胞器內的分布和自噬的形成過程，明確ARV編碼的蛋白質在誘導自噬中的作用。構建表達自噬蛋白Beclin-1和Atg 4B的siRNA慢病毒載體，通過RNA干擾技術調控自噬蛋白的表達，測定ARV不同感染階段的病毒滴度和基因表達，檢測感染細胞中LC3 II蛋白的聚集，闡明自噬蛋白與ARV病毒複製的關係。分別套用凋亡抑制劑、自噬誘導劑和自噬抑制劑處理ARV感染細胞，分析ARV感染細胞信號轉導通路的活化程度，評價ARV感染誘導的細胞凋亡和自噬的關係。
結題摘要
本項目對禽呼腸孤病毒（ARV）結構蛋白σB、σC和非結構蛋白σNS、p10、p17進行研究，首次發現p17具有誘導細胞自噬的作用，而其他蛋白不具有該作用。通過鑑定p17 蛋白的核輸入信號與核輸出信號，並突變p17蛋白核輸入信號相關的功能胺基酸位點後，探究了p17 蛋白的細胞定位對其誘導的細胞自噬的影響，以及對病毒複製的影響。p17蛋白可以通過PTEN、AMPK和PKR/eIF2α等途徑誘導細胞發生自噬，p17誘導PTEN信號通路的上游蛋白是p53，對自噬調控的通路主要為p53-PTEN-mTOR。 本項目分別在細胞、雞胚及SPF雞水平上證明，不論在體內還是在體外，細胞自噬可以促進ARV的複製。自噬抑制劑可顯著抑制ARV誘導的細胞凋亡，降低病毒複製水平；對雞胚，可顯著降低ARV導致的胚體死亡率；ARV感染1日齡 SPF雞後能夠在體內誘導自噬的發生，但這種自噬現象是短期的，且自噬水平與病毒的複製具有一定的時間依賴性；ARV能夠利用機體的短期自噬使得病毒滴度得到短暫的升高；使用自噬抑制劑CQ能夠導致組織器官細胞內LC3-Ⅱ蛋白的累積，並能使得病毒複製水平略有降低。本項目發現p17還可以對抗細胞天然免疫反應，間接促進ARV病毒複製；採用高通量測序技術對ARV感染細胞的轉錄組進行研究，發現ARV感染的干擾素耐受機制是病毒複製阻斷了細胞自身的mRNA的翻譯，繼而阻斷了干擾素通路末端效應基因的激活。 本項目的研究成果為ARV感染的防控提供了理論依據，對於闡明其他動物病毒性傳染病的致病機理亦具有參考價值。
