《硬脂醯輔酶A脫氫酶1在鵝肥肝形成過程中的功能研究》是依託揚州大學，由龔道清擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：硬脂醯輔酶A脫氫酶1在鵝肥肝形成過程中的功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：龔道清
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
鵝肥肝富含對人體有益的不飽和脂肪酸，是對人類健康有益的高檔食品。本研究選擇與鵝肥肝形成密切相關的硬脂醯輔酶A脫氫酶1基因，通過對該基因的全長基因組序列和cDNA序列進行分離克隆，分析該基因結構；利用PCR-SSCP和PCR-RFLP等方法研究該基因多態位點在不同鵝群的遺傳變異及其與朗德鵝產肝性能的關係，並檢測該基因編碼蛋白在肥肝形成過程中的表達規律；以鵝原代成熟肝臟細胞為材料，採用過量表達和RNA干擾SCD1基因等方法，分析加強和干擾SCD1基因的表達前後肝臟細胞內脂肪代謝的變化及細胞凋亡情況，採用Real-time 定量RT-PCR技術研究細胞內脂類代謝相關基因的表達水平，闡明該基因在鵝肥肝形成過程中的生物學功能，為鵝肥肝性狀的分子標記輔助選擇和營養調控提供理論依據，同時也為人類脂肪肝的研究提供重要參考。
結題摘要
本研究以朗德鵝為素材，採用RT-PCR和RACE技術獲得了朗德鵝SCD1基因的完整cDNA序列，包含1083 bp的CDS序列，78 bp的5’UTR，2.1 kb的3’UTR，包含6個外顯子，編碼360個胺基酸；預測其蛋白質分子量為40967.2 Da，等電點為8.8，為親水性蛋白，存在四個跨膜區域。通過PCR-SSCP技術檢測到SCD1基因外顯子和非編碼區上共6個SNPs，在朗德鵝外顯子2的132 bp處存在T/C鹼基替換，產生了3種基因型，各基因型間產肝性能差異不顯著。3’UTR區域檢測到5個SNPs，共形成5種基因型組合，其中H1H1的肝體比和肝重均大於其它4種單倍型組合，可以作為基因標記進行高產肝個體的選擇。利用高能玉米對70日齡朗德鵝進行填飼，western blotting技術檢測朗德鵝肝臟中SCD1基因編碼蛋白水平發現，填飼後SCD1基因編碼的蛋白水平增加。利用“膠原酶消化法”從朗德鵝胚中分離出高活性、高純度的原代成熟肝臟細胞，建立鵝胚原代肝細胞培養體系。一定劑量果糖、胰島素單獨添加以及協同作用均能增加鵝原代培養肝細胞SCD1基因表達水平。通過構建SCD1基因真核表達載體轉染鵝胚原代肝細胞，螢光定量PCR檢測SCD1基因mRNA水平顯著升高，同時細胞中脂類代謝相關基因SREBP-1基因表達水平也顯著升高。根據SCD1的mRNA序列設計合成3對小雙鏈干擾RNA（siRNA）以及陰性對照，轉染鵝原代肝細胞，RNA干擾SCD1基因表達後，與脂肪合成相關的基因FAS、ACC表達下調，肝細胞外液的脂類代謝產物減少，反映了肝細胞脂類合成減少。研究結果表明SCD1基因能促進肝臟脂肪合成，在鵝肥肝形成過程中起重要作用。
