矽膠柱層析

矽膠層析法的分離原理是根據物質在矽膠上的吸附力不同而得到分離， 一般情況下極性較大的物質易被矽膠吸附，極性較弱的物質不易被矽膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。

基本介紹

• 中文名：矽膠柱層析
• 根據：物質在矽膠上吸附力不同而分離
• 原料：乙酸乙酯等
• 注意：將柱子必須裝平整、均勻

矽膠柱層析流動相

極性小的用乙酸乙酯：石油醚洗脫；極性較大的用甲醇：氯仿洗脫；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸洗脫；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

矽膠柱層析慣用方法

1.稱量。200-300目矽膠，稱30-70倍於上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的矽膠H。乾矽膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g矽膠，用燒杯量100ml也可以。

2.攪成勻漿。加入乾矽膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。

如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置乾燥。氯仿用無水氯化鈣乾燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。

3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些矽膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。

4.壓實。沉降完成後，加入更多的石油醚，用雙聯球或氣泵加壓，直至流速恆定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由於柱床萎縮產生開裂。

5.上樣。乾法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣後，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近矽膠表面。然後就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞矽膠表面。

6.過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度並不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g矽膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g矽膠（200-300目），20-50ml收一餾分。

7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個數量級。

8.送譜。收集的產品旋乾，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最後純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“矽膠”峰。

注意事項

1.先根據TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質Rf值之差最大化

2.將柱子必須裝平整、均勻

3.考慮有限柱填料的吸附量

4.可考慮用梯度法分開並洗脫