環境正遭受到類固醇化合物的嚴重污染，人類健康面臨著重大威脅，睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)對類固醇化合物的降解作用為我們對類固醇化合物污染的治理。睪丸酮叢毛單胞菌(comamonastrstosteroni)是叢毛單胞菌屬的一個種，在自然界中分布廣泛，為條件致病菌，可引起呼吸道等部位的感染。國內尚未見從血液中分離出該菌的報導。我們從血液培養中連續兩次分離出同一種睪丸酮叢毛單胞菌。
基本介紹
- 中文學名：睪丸酮叢毛單胞菌
- 拉丁學名：C.testosteroni
- 屬：叢毛單胞菌屬
- 分布區域：自然界中分布廣泛
簡介,血液中分離出睪丸酮叢毛單胞菌,結果表明睪丸,
簡介
睪丸酮叢毛單胞菌 ( C.testosteroni)是叢毛單胞菌屬( Comamonas)的一個種 ,在自然界中分布廣泛 ,為條件致病菌,可引起呼吸道等部位的感染。國外已有從血液、膿液、尿液和呼吸道分泌物等臨床標本分離出該菌的報導 。我們從血液培養中連續兩次分離出同一種睪丸酮叢毛單胞菌。 睪丸酮叢毛單胞菌 ( C.testosteroni)是叢毛單胞菌屬( Comamonas)的一個種 ,在自然界中分布廣泛 ,為條件致病菌 ,可引起呼吸道等部位的感染。國外已有從血液、膿液、尿液和呼吸道分泌物等臨床標本分離出該菌的報導 ,但作者尚未見國內有關報導。
血液中分離出睪丸酮叢毛單胞菌
睪丸酮叢毛單胞菌（comamonas trstosteroni）是叢毛單胞菌屬的一個種，在自然界巾分布廣泛，為條件致病菌．可引起呼吸道等部位的感染。國內尚未見從血液中分離出該菌的報導。我們從血液培養中連續兩次分離出同一種睪丸酮叢毛單胞菌。 而睪丸酮叢毛單胞菌胞菌在降解類固醇、 多環芳烴類物質 PHAs 等穩定 原始菌株只具有 Amp 抗性，只能生長在含 Amp 的污染 化 合 物 中具 有 重 要 作 用 Coulter and Talalay 培養基中生長，不能在含有這兩種抗生素的培養基1968 Goyal and Zylstra 1996mobuset al. 1997 中生長。Mobus and Maser 1998 Maser et al. 2000 2001 bp M 1 2Skowasch et al. 2002，在污染環境修復中扮演著重要的角色。睪丸酮叢毛單胞菌的 3琢HSD/CR 是一種 15000 10000誘導酶，在該細菌染色體上 3琢HSD/CR 基因的上游 7500 5000存在兩個 10 bp 的回文操縱基因序列，該基因附近還存在兩個抑制子 RepA 和 RepB， 通過轉錄和翻譯抑 2500 2000制該基因的表達 Xiong and Maser 2001 Xiong et al.2001 2003a b c。 1000 活化因子activator是指與增強子或與活化因子 750結合區域結合的蛋白，能夠提高轉錄的起始速度 500Browning and Busby 2004。 戴藝民等2005 2006將 250來自睪丸酮叢毛單胞菌的全長 564 bp 和部分409 100bp activator 分 別 與 來 自 睪 丸 酮 叢 毛 單 胞 菌 的3琢HSD/CR 在體外進行共轉化研究，
結果表明睪丸
1 PCR 篩選工程菌酮叢毛單胞菌的 activator 能提高 3琢HSD/CR 轉錄 Figure 1 Genetically engineered bacteria screened by PCR速率。 C. Wide range DNA marker 10015 000 1： test pa M： 由於人工合成和生物自身代謝排入環境中的類 C. 2： testpb固醇污染物與日俱增，有必要對睪丸酮叢毛單胞菌.基因工程菌的 Southern 檢測進行改造， 提高該細菌的 3琢HSD/CR 等一系列降解酶基因的表達，才能達到利用睪丸酮叢毛單胞菌快 提取睪丸酮叢毛單胞菌野生菌 在圖中簡寫為速降解該類污染物、 淨化環境的目的。 本研究利用電 C. C. test， 下 同 、testpa和 C. testpb 的 染 色 體穿孔法將重組質粒 pKtac1act1 和 pKtac1act2 整合 DNA， EcoR玉酶切後進行雜交檢測， ddH2O 作 用 以化入睪丸酮叢毛單胞菌的染色體中，篩選得到 2 株 為陰性對照，以 EcoR玉酶切 pKtac1 作為陽性對照。睪丸酮叢毛單胞菌基因工程菌，對這兩株基因工程 Southern 雜交的結果見圖 2。從 Southern 雜交圖可菌的關鍵酶 3琢HSD/CR 表達情況和細菌穩定性進 見 ， 基 因 工 程 菌 C .testpa 和 C.testpb 的 染 色 體行檢測分析，以期為進一步利用工程菌提供理論基 DNA 有明顯的雜交條帶，睪丸酮叢毛單胞菌的染色礎。 體 DNA 沒有雜交條帶的出現。由於睪丸酮叢毛單胞 菌的染色體上不存在 pK18 的片段，而在挑選出來的1 結果與分析 基因工程菌的染色體上能夠檢測到 pK18 的片段的1.1 利用 PCR 篩選基因工程菌 存在，由此可見質粒 pKtac1act1 和 pKtac1act2 確實 整合入睪丸酮叢毛單胞菌的染色體中。 質粒電穿孔轉化後的細菌在含有 Amp 和 Kan的 LB 固體培養基上 30℃ 過夜培養。挑選單克隆在 1.3 睪丸酮對細菌的誘導含有 Amp 和 Kan 的 LB 液體培養基中進行過夜振 睪丸酮叢毛單胞菌的 3琢hsd/CR 是受睪丸酮誘盪培養，提取重組子的染色體 DNA 作為模板， A1 以 導的酶。在 LB 培養基中添加睪丸酮對 Comamonas和 A2 為引物進行 PCR 擴增，擴增產物用 1.0的瓊 C. testosteroni、 testpa 和 C. testpb 進 行過夜 培養 ，脂糖凝膠進行電泳 圖 1。篩選到 2 株基因工程菌， 睪丸酮的終濃度為 270 滋g/mL。分別提取這 3 個菌即質粒 pKtac1act1 同源整合入睪丸酮叢毛單胞菌 株的總蛋白， 將細菌的總蛋白定量為 1 mg/mL， 稀釋染色體產生的工程菌 C. testpa 和質粒 pKtac1act2 100 倍後，用 ELISA 法檢測 3琢HSD/CR 的表達量，同源整合入睪丸酮叢毛單胞菌染色體產生的工程菌 結果如圖 3 所示。從圖中可見，睪丸酮叢毛單胞菌野 睪丸酮叢毛單胞菌工程菌構建及穩定性分析
