《白酒中α-亞麻酸和 L-苯基乳酸的測定高效液相色譜法》是2019年12月30日實施的一項行業標準。
基本介紹
- 中文名：白酒中α-亞麻酸和 L-苯基乳酸的測定高效液相色譜法
- 標準編號：T/AHFIA 043—2019
- 發布日期：2019年12月30日
- 實施日期：2020年01月30日
起草人,起草單位,主要內容,
起草人
王銀輝、張會敏、劉國英、王錄、沈小梅、胡心行、馬金同、秦傑傑、楊恩賀、 汪菲、朱夢旭。
起草單位
安徽古井貢酒股份有限公司、安徽瑞思威爾科技有限公司、安徽國科檢測科技有 限公司、安徽潤安信科檢測科技有限公司。
主要內容
主要條款：
本標準的章節由範圍、試劑與材料、主要儀器、測定步驟、結果計算、精密度以及檢出限、方法不確定度組成。
本標準中主要技術參數、試驗驗證參數如下：
1、主要技術參數的確認
1.1色譜柱的選擇
實驗選取了兩根不同型號的色譜柱，兩種型號的色譜柱分別為HSS T3和BEH C18色譜柱，通過使用單因子變數法，最終確定BEH C18色譜柱分離較好，能夠將α-亞麻酸和L-苯基乳酸完全分離。色譜圖如圖1所示
圖1所示為：標準樣品的色譜圖
1.2 流動相的選擇
實驗對流動相的選擇首先選定水-甲醇、乙酸-甲醇，水-乙腈，甲醇-磷酸等進行實驗，通過實驗後，均發現效果較差，不能夠很好的實現分離。發現使用低濃度的磷酸對兩種物質的分離會起到很大的作用，配製1%、0.5%以及0.1%的磷酸溶液作為流動相分別進行實驗，實驗結果表明，使用0.1%的磷酸分離較好，而且峰形較好，滿足使用要求，故實驗選擇0.1%的磷酸作為流動相進行α-亞麻酸和L-苯基乳酸的分離。
1.3 波長的選擇
通過查找文獻並進行試驗， 實驗階段對本次實驗進行了系統歸納與總結，通過使用210-500nm的波長段掃描，得到相應的3D掃描圖，經過後期的提取色譜圖和文獻報導，確定最佳檢測波長205nm。標樣驗證進行相應的波長驗證。
2、試驗驗證
各項技術參數確定後，標準制定小組通過精密度、重現性、穩定性和回收率試驗驗證效果，獲得的平行測定結果的相對標準偏差RSD%均小於5，其精密度符合方法學的要求；並進行了異地驗證試驗及方法不確定度的計算，提高了本方法規範性、統一性和科學性。
2.1標準曲線的建立
準確吸取α-亞麻酸和L-苯基乳酸混合標準溶液，分別配製5個濃度的溶液（α-亞麻酸標準曲線濃度：20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、400mg/L；L-苯基乳酸標準曲線濃度：25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L）。測定5個濃度的標準混合工作液，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線；R2=0.998，線性良好。
2.2精密度
對同一白酒樣品，按照樣品製備方法平行製備6份樣品，並用本方法進行α-亞麻酸和L-苯基乳酸檢測（其中一個樣品重複進樣6次），所得重複性和重現性檢測結果如表1和表2所示
表1 α-亞麻酸和L-苯基乳酸重複性檢測結果
項目 次數 1 2 3 4 5 6 RSD
L-苯基乳酸 44.1 44.57 44.73 44.96 44.84 45.08 2.20%
α-亞麻酸 50.53 49.74 50.47 50.96 50.52 51.39 1.10%
由表1知，六次重複測定結果的RSD為2.20%和1.08%，方法重複性良好。
表2 α-亞麻酸和L-苯基乳酸重現性檢測結果
項目 次數 1 2 3 4 5 6 RSD
L-苯基乳酸 415.32 398.10 401.26 450.22 438.30 387.62 4.92%
α-亞麻酸 399.62 396.24 402.64 401.28 404.64 403.16 7.46%
由上表2知，重現性測定結果的RSD=4.92%和7.46%，重現性良好。
2.3加標回收率實驗
取3個已知α-亞麻酸和L-苯基乳酸含量分別為：48.62mg/L和15.45mg/L的樣品，使用已知濃度的α-亞麻酸和L-苯基乳酸標準品配製三個濃度水平的樣品，按照標準所述方法處理檢測，計算回收率均在80%-120%之內，具體如下表3所示。
表3酒樣中α-亞麻酸和L-苯基乳酸的加標回收率實驗結果
加標物 底物濃度（mg/L） 加標水平（mg/L）
40 100 400
實測值 回收率 實測值 回收率 實測值 回收率
L-苯基乳酸 15.45 47.95 81.25% 112.85 97.40% 346.07 82.66%
α-亞麻酸 48.62 85.12 91.25% 145.92 97.30% 415.14 91.63%
2.4 方法的檢出限與定量限
對本方法作如下靈敏度測試：靈敏度測試包括儀器的靈敏度與方法的靈敏度，儀器的靈敏度用儀器的檢出限表示，取信噪比≥3的L-苯基乳酸和α-亞麻酸的混合標準溶液的最小濃度為儀器檢出限；方法的靈敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的L-苯基乳酸和為α-亞麻酸混合標準溶液的最小濃度為方法定量限。所得的相關數據見表4。
表4酒樣中α-亞麻酸和L-苯基乳酸的定量限和檢出限的數據
名稱 檢出限mg/L 定量限mg/L
L-苯基乳酸 1.00 5.00
α-亞麻酸 1.00 5.00
2.5異地驗證實驗
本方法已與安徽國科檢測科技有限公司液相液質室進行了異地實驗室驗證，結果如下表5。
表5酒樣中α-亞麻酸和L-苯基乳酸異地實驗室比對結果
