瘦肉精檢測試劑是一種針對鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇等最常用的瘦肉精產品含量快速檢測試劑。
基本介紹
- 中文名：瘦肉精檢測試劑
- 外文名：Clenbuterol detection reagents
- 類型：檢測試劑
- 檢測對象：瘦肉精
- 包括內容：鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺等
- 類型：鹽酸克侖特羅速測卡、檢測試劑盒
物質分類,中毒事件,毒害作用,檢測方法,速測方法,劑條檢測,試劑盒法,綜合治理,
物質分類
作為“瘦肉精”使用的β- 激動劑主要有兩種類型。一種是苯乙醇胺類，如鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）和沙丁胺醇（salbutamol）等，另一種是雙苯烷胺類，如萊克多巴胺（Ractopamine）等。口服CL對牛、雞、豬和綿羊等動物都具有增加胴體肌肉組成和減少脂肪含量的作用，對增加體重和提高料肉比也有一定作用]。不同動物品種對β-激動劑的反應性不同。其中對綿羊的促生長作用最大，對雞的作用最小，對牛、豬的作用中等。這可能是由於不同動物對β- 激動劑的反應性不同，也可能與動物的生長潛力有關。
瘦肉精
瘦肉精中毒事件
鹽酸克倫特羅殘留引起的中毒事件最早發生在西班牙，1989 年10 月至1990 年7 月間暴發因食用牛肝引起135 人中毒，這次中毒事件發生於食用牛肝後的30 min 至6 h，最長持續至40 h，共有43 個家庭中91%的成員受到影響。在食用的牛肝中發現CL含量達160～291 μg/kg。1992 年1 月至4 月又在該國北部地區暴發232 例中毒病例。從屠宰場獲得的牛肝樣品中CL 含量為19～5395 μg/kg。病人尿液中CL 含量為11～486 μg/L。
瘦肉精
瘦肉精1990 年秋季，在法國共有8個家庭22人發生CL中毒[5]，中毒症狀表現在食用牛肝後的1～3 h，發病1～3 d 後全部恢復。食用牛肝中CL含量達375～500μg/kg。在這些中毒事件中大多數病人中毒症狀都表現為心悸、肌肉震顫、肌肉疼痛、神經症狀、頭暈頭痛、興奮、噁心嘔吐、發熱寒戰等。中毒的發生無年齡（1~68 歲）和性別差異。
我國香港、上海、北京、浙江、廣東、山東、河北、廣西、黑龍江和安徽等地均有“瘦肉精”中毒事件報導，2001 年國家嚴格管控鹽酸克倫特羅以來，萊克多巴胺、沙丁胺醇等“新型瘦肉精”使用呈上升趨勢。但鹽酸克倫特羅價格便宜，且毒性最大，世界範圍內的中毒事件基本都是以鹽酸克倫特羅為禍首。
毒害作用
當人們食用了含CL 殘留的動物內臟和肉品後，常造成急性或慢性食肉中毒，出現心悸、心慌、噁心、嘔吐、肌肉顫抖等臨床症狀。一般情況下，鹽酸克倫特羅對於人體的危害主要是由於它在動物肝臟、腎臟、肌肉等組織器官中的殘留所引起。消費者過量食用後，容易產生心血管毒性，表現為噁心、頭暈、心率過快、肌肉震顫、高血糖、低血鉀等症狀，尤其對心血管疾病患者危害更大。
瘦肉精危害
瘦肉精危害檢測方法
速測方法
本試紙採用競爭抑制免疫層析技術的原理來測定動物尿液、組織和飼料中的鹽酸克侖特羅。試劑含有被預先固定於膜上檢測帶（T）的鹽酸克侖特羅偶聯物和被膠體金標記的抗鹽酸克侖特羅單克隆抗體。檢測時樣品和標記抗體競爭結合偶聯物。檢測限為3ng/ml（3ppb）。
樣品製備
1、尿液：樣本必須用潔淨、乾燥不含有任何防腐劑的塑膠尿杯或玻璃容器收集。可直接檢測，如有渾濁請先離心（3000rpm,5min）取上清。若不能及時檢測送檢，尿樣樣本在2-8℃冷藏可以保存48小時。長期保存需冷凍於-20℃，忌反覆凍融。
2、肉：裝入大約4克碎的肉樣本（肉泥）於離心管中（醬豬牛肉加2ml水或PBS），蓋緊管蓋，在80℃左右的水浴鍋中水浴10 分鐘；吸取煮出的溶液到1.5ml的離心管中。如有明顯黃色渾濁請離心（3000rpm,5min），取上清檢測。如果檢測牛肉請吸出肉湯離心(3000rpm,5min)，取上清檢測。
3、飼料：取1g樣品粉末於離心管中，加入5ml水，混勻，置於超音波水浴中超聲30min（每10min取出混勻1次），超聲提取後冷卻至室溫，於3000rpm離心5min，取上清液進行測試。
操作步驟
1、在進行測試前先仔細閱讀使用說明書，使用前將本品和待檢樣本溶液恢復至室溫。
2、吸取待檢樣品溶液，緩慢滴加80~100μl(約2~3滴）於加樣孔中，加樣後開始計時。
3、在5分鐘內讀取結果，超過5分鐘的結果判讀無效。
結果判定
陽性：位置C顯示出紅色條帶，位置T無條帶或顏色非常模糊時判為陽性。
陰性：位置C顯示出紅色條帶，位置T同時出現紅色條帶時，判為陰性。
無效：位置C不顯示出紅色條帶，則無論位置T顯示出紅色條帶與否，該試紙卡均判為無效。
劑條檢測
本品採用高度特異性的抗體抗原反應及免疫層析分析技術，套用單克隆抗體競爭結合鹽酸克侖特羅偶聯物和樣品中可能含有鹽酸克侖特羅的原理。試劑含有被事先固定於膜上測試區（T）的鹽酸克侖特羅偶聯物和被膠體金標記的抗鹽酸克侖特羅單克隆抗體。本產品的檢測鹽酸克侖特羅濃度3ng/ml（3ppb）以上為陽性。
樣品製備
1、飼料：樣品粉碎後過20目篩，得試樣。取2g試樣於50ml離心管中，加入10ml水，混勻，置於超音波水浴中超聲30min（其間每10min取出混勻1次），超聲提取後冷卻至室溫，於2500rpm離心5min，取上清液進行測試。
2、尿液：用尿液直接進行測試，如有渾濁請先離心取上清。尿液標準必須收集在潔淨、乾燥不含有任何防腐劑的塑膠尿杯或玻璃容器內。若不能及時檢測送檢，尿樣標準在2-8℃冷藏可以保存48小時。長期保存需冷凍於-20℃，忌反覆凍融。
豬肉
豬肉3、肉：裝入大約4克碎的豬肉樣本（肉泥）於離心管中，蓋緊管蓋。將裝樣品的離心管在微沸的水浴鍋中水浴10 分鐘；吸取3滴以上（約100ul）煮出的溶液到1.5ml的離心管中。如有明顯黃色渾濁請離心，使用上清液作為待測樣品溶液。
操作步驟
1、在進行測試前先完整閱讀使用說明書，
2、從原包裝中取出試劑，打開後平放在桌面上，請在1小時內儘快使用。
3、用滴管吸取待檢樣品溶液，緩慢滴加3滴於加樣孔中，加樣後開始計時。
4、結果應在10分鐘讀取，超過20分鐘的時間判讀無效。
結果判定
陽性：位置C顯示出紅色線條，而位置T不顯色時；或者位置C顯示出紅色線條，位置T顯示顏色非常模糊時判為陽性。
陰性：位置C顯示出紅色線條，位置T同時顯示出紅色線條，且T線顏色接近C線或者深於C線時，判為陰性。
無效：位置C不顯示出紅色線條，則無論位置T顯示出紅色線條與否，該試紙卡判為無效。請儘快與當地供應商聯繫。
試劑盒法
測定的基礎是抗原抗體反應。微孔板上包被有針對兔IgG（Clenbuterol抗體）的羊抗體，含有克倫特羅抗原的樣品或標準品與酶標記物被加入到小孔中，經過孵育及洗滌步驟後，游離的抗原與抗原酶標記物競爭抗體結合位點，沒有結合的抗原酶標記物在清洗步驟中被除去，將顯色液加入到孔中並且孵育，結合的酶標記物將無色的發色劑轉化為藍色的產物。加入反應停止液後使顏色由藍色轉為黃色。在450nm處測量，吸光強度與樣品的克倫特羅濃度成反比。
操作步驟
稱取1克剪碎或勻漿過的樣品，置於提取液瓶中，後再加入一瓶固體提取劑，扭緊管蓋，振搖樣品一分鐘後，在100℃水浴中水浴加熱5分鐘。取出後冷卻至室溫,取清亮液體直接加樣。
瘦肉精檢測試劑
瘦肉精檢測試劑從檢測卡袋中取出所需的檢測卡，放置室溫，在卡上做好樣品編號標記。用一次性取樣滴頭吸取樣品，滴入加樣孔，每孔4滴，在加液過程中勿使液體溢出加樣孔。5-10分鐘內觀察結果，10分鐘後的結果無效。
結果判定
陰性: 對照線(C)和測試線(T)同時出現，表明樣品中克倫特羅的濃度小於3ng/ml。
弱陽性：對照線(C)和測試線(T)同時出現，測試線(T)明顯淺於對照線(C)，表明樣品中克倫特羅濃度大於3ng/ml而小於5ng/ml。
陽性: 只有對照線(C),無樣品測試線(T)，表明樣品中克倫特羅的濃度大於5ng/ml。
無效: 對照線(C)和測試線(T)都不出現。或者對照線（C）不出現。
綜合治理
1997 年3 月25 日，我國農業部發布了《關於嚴禁非法使用獸藥的通知》，嚴禁將β- 腎上腺激動劑等藥物作為動物促生長劑使用。
瘦肉精檢測
瘦肉精檢測1997 年9 月4 日，農業部發布《動物性食品中獸藥最高殘留限量》，規定CL 在馬、牛肌肉、肝臟、腎臟及牛奶中的最高殘留限量（Maximum Residue Limit，MRL）分別為0.1、0.5、0.5 和0.05 μg/kg，日允許攝取量（AcceptableDaily Intake，ADI）為0~0.004μg/kg/d。
由於香港特區政府衛生署1998 年5 月14 日公告在內地供港的活豬內臟中查出含有違禁藥物的殘留成分—鹽酸克倫特羅。為保證食品衛生安全，特區政府衛生署已做出禁止在市場上銷售內臟的決定。為確保供港活豬的衛生質量，1998 年6 月19 日，對外貿易經濟合作部、農業部、國家出入境檢驗檢疫局聯合下發《關於嚴禁非法使用獸藥和加強檢疫工作等有關事項的通知》。
