病毒是在活細胞內寄生並以複製方式增殖的一種生命體。病毒進入細胞後利用宿主的營養物質合成自身的核酸、蛋白，組裝形成新病毒並釋放出細胞外。在此過程中，病毒與宿主細胞發生相互作用，病毒載量呈指數增加的同時可引起細胞形態、代謝和微環境等指標的變化，通過這些指標的檢測，可以間接反應病毒的複製、增值與毒力等情況。
基本介紹
- 中文名：病毒增殖指標檢測
- 臨床意義：反應病毒的增值毒力等情況
病毒增殖的指標,檢測方法,臨床意義,
病毒增殖的指標
1.病毒載量變化
現代螢光定量PCR技術可對DNA病毒和RNA病毒進行定量檢測，通過核酸擴增，病毒載量以拷貝數為單位，計算單位體積內含有的病毒數量。需要注意的是，載量測定反映的是檢測物中含有病毒核酸的多少，並不能反應活病毒或是完整病毒粒子的量。
2.病毒滴度變化滴度即病毒的毒力或毒價，通常指每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數，反映活病毒或具有功能的病毒數，以最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半數致死量（LD50）表示，根據接種對象不同採用不同的測定指標。
3.蛋白的表達病毒進入宿主細胞後可釋放核酸，大量複製，合成結構蛋白與非結構蛋白，在此過程中又與宿主細胞發生相互作用，上調或下調細胞內部分蛋白的表達，可通過檢測病毒的蛋白直接反映病毒的增殖情況，也可通過檢測宿主細胞內的蛋白表達情況間接反映病毒的增殖。而後一種檢測方法除病毒數量外，也可反映病毒功能和與宿主的相互作用。
現代螢光定量PCR技術可對DNA病毒和RNA病毒進行定量檢測，通過核酸擴增，病毒載量以拷貝數為單位，計算單位體積內含有的病毒數量。需要注意的是，載量測定反映的是檢測物中含有病毒核酸的多少，並不能反應活病毒或是完整病毒粒子的量。
2.病毒滴度變化滴度即病毒的毒力或毒價，通常指每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數，反映活病毒或具有功能的病毒數，以最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半數致死量（LD50）表示，根據接種對象不同採用不同的測定指標。
3.蛋白的表達病毒進入宿主細胞後可釋放核酸，大量複製，合成結構蛋白與非結構蛋白，在此過程中又與宿主細胞發生相互作用，上調或下調細胞內部分蛋白的表達，可通過檢測病毒的蛋白直接反映病毒的增殖情況，也可通過檢測宿主細胞內的蛋白表達情況間接反映病毒的增殖。而後一種檢測方法除病毒數量外，也可反映病毒功能和與宿主的相互作用。
檢測方法
1．螢光定量PCR技術
通過螢光探針或螢光染料可以特異或非特異的利用螢光信號計算待檢物中的核酸含量，常用Taqman探針法或SYBR Green染料法。Taqman螢光定量技術需要特定的標準品並繪製標準曲線，對模板的核苷酸變異較為敏感,可用於DNA和RNA測定。SYBR Green染料法基於染料結合dsDNA雙螺旋小溝，螢光信號強度與雙鏈DNA的數量相關，可用內參基因做相對定量檢測。
2．滴度測定方法
（1）滴度測定反映活病毒的數量，表示可以感染並進入到靶細胞中的病毒基因組數。常用方法有空斑計數法、TCID50法和最大稀釋法等，其中空斑計數法是病毒滴度檢測的金標準。針對不同的病毒及不同的培養細胞採用不同的方法。其他檢測方法如血凝效價、OD280等已經逐漸淘汰。
3．WB測蛋白表達
病毒感染細胞後自身蛋白和宿主蛋白表達可發生變化，收集感染細胞，裂解並釋放蛋白，通過電泳將總蛋白從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然後用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質，可定性檢測病毒，通過計算蛋白濃度和灰度掃描可半定量檢測病毒。
4.IF檢測病毒蛋白
病毒感染細胞後可通過螢光標記的特異性抗體與病毒抗原的結合鑑定、觀察病毒感染情況。可用做病毒滴度測定時的直接觀察指標，也可結合病毒載量、螢光光斑計數判斷活病毒數。
5.ELISA檢測抗原和抗體
利用抗原抗體結合的特異性，通過酶標記技術的放大作用，定性和定量檢測病毒感染後宿主病料中的抗原物質以及宿主針對該病毒產生的抗體。因操作簡單、經濟方便在臨床套用較廣。
通過螢光探針或螢光染料可以特異或非特異的利用螢光信號計算待檢物中的核酸含量，常用Taqman探針法或SYBR Green染料法。Taqman螢光定量技術需要特定的標準品並繪製標準曲線，對模板的核苷酸變異較為敏感,可用於DNA和RNA測定。SYBR Green染料法基於染料結合dsDNA雙螺旋小溝，螢光信號強度與雙鏈DNA的數量相關，可用內參基因做相對定量檢測。
2．滴度測定方法
（1）滴度測定反映活病毒的數量，表示可以感染並進入到靶細胞中的病毒基因組數。常用方法有空斑計數法、TCID50法和最大稀釋法等，其中空斑計數法是病毒滴度檢測的金標準。針對不同的病毒及不同的培養細胞採用不同的方法。其他檢測方法如血凝效價、OD280等已經逐漸淘汰。
3．WB測蛋白表達
病毒感染細胞後自身蛋白和宿主蛋白表達可發生變化，收集感染細胞，裂解並釋放蛋白，通過電泳將總蛋白從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然後用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質，可定性檢測病毒，通過計算蛋白濃度和灰度掃描可半定量檢測病毒。
4.IF檢測病毒蛋白
病毒感染細胞後可通過螢光標記的特異性抗體與病毒抗原的結合鑑定、觀察病毒感染情況。可用做病毒滴度測定時的直接觀察指標，也可結合病毒載量、螢光光斑計數判斷活病毒數。
5.ELISA檢測抗原和抗體
利用抗原抗體結合的特異性，通過酶標記技術的放大作用，定性和定量檢測病毒感染後宿主病料中的抗原物質以及宿主針對該病毒產生的抗體。因操作簡單、經濟方便在臨床套用較廣。
臨床意義
1.目前臨床常用的病毒增殖檢測多為螢光定量PCR技術和ELISA技術，其他的檢測方法由於技術要求高、操作繁瑣和實驗室實施等要求多套用在基礎研究機構。兩種方法各有其套用前景，ELISA由於快速、簡單、對技術要求不高等更適宜病毒感染人群的大範圍篩查，PCR可對病毒核酸、耐藥位點等監測更宜進行鑑定、分型、確認和療效監測，臨床套用時應結合檢測目的綜合評估，選擇對患者最適合的檢測方式。
