《用體外親和力成熟技術提高抗HFRS病毒單鏈抗體結合活性》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由閻岩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：用體外親和力成熟技術提高抗HFRS病毒單鏈抗體結合活性
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：閻岩
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
- 批准號：39700134
- 申請代碼：H1112
- 負責人職稱：講師
- 研究期限：1998-01-01 至 2000-12-31
- 支持經費：10（萬元）
中文摘要
本研究用隨引物PCR和錯配PCR兩種方法分別突變抗漢灘病毒（HTNV）核蛋白（NP）鼠源性單克隆抗體（mAb）重鏈可變區（VH）基因的互補決定區3（CDR3）和全長VH基因，分別構建了庫容量均為10（7）左右的噬菌體抗體庫。表達並純化NP編碼基因5′端300bp的片段與GST的融合蛋白，生物素化後用於上述噬菌體抗體庫的親和篩選，並篩選出親和力有所提高的抗體。在此基礎上，構建了鼠/人嵌合Fab抗體雙特異性抗體表達載體，並在E.coli中表達，鑑定它們免疫學特性，證實表達的雙特異性抗體的結和活性優於單鏈抗體（ScFv）和鼠/人嵌合Fab。還構建了細胞內表達的ScFv真核表達載體，在真核細胞內成功表達，並建立穩定轉染的細胞系，正在進一步研究細胞內抗體的功能。
