《用於腫瘤幹細胞快速分離鑑定的微流控晶片研究》是依託浙江大學，由牟穎擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：用於腫瘤幹細胞快速分離鑑定的微流控晶片研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：牟穎
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
越來越多的研究表明，腫瘤幹細胞可能是癌症的罪魁禍首，是腫瘤發生、發展與維持的基礎，但是腫瘤幹細胞的分離識別十分困難，是腫瘤幹細胞研究中亟待解決的瓶頸問題。本項目研製自主智慧財產權的高通量單細胞分離識別一體化微流控晶片，設計自吸式進樣的微流控晶片，將數萬個細胞單獨分隔到不同的微反應室，實現高通量單細胞快速分離，隨即將分離開的單細胞直接反轉錄PCR，進行腫瘤幹細胞鑑定；建立簡便的基於微流控晶片的腫瘤幹細胞單細胞分離與反轉錄PCR鑑定新方法，解決腫瘤幹細胞特異性鑑定困難的問題。所研製的微流控晶片易於操作、敏感度高（單細胞）、準確性好（可計數）、試劑節省（數微升/片），適合於任何實驗室進行腫瘤幹細胞等稀少細胞的快速鑑定。本項目為腫瘤幹細胞的研究提供一種單細胞分離與特異性鑑定的新工具，用於鑑定腫瘤幹細胞的分子遺傳特徵和特異標誌物，為腫瘤學研究提供科學依據，為臨床病情判斷、病程監控，指導治療等奠定基礎.
結題摘要
腫瘤幹細胞是癌症的罪魁禍首，是腫瘤發生、發展與維持的基礎，但是腫瘤幹細胞的分離鑑定十分困難，是腫瘤幹細胞研究中亟待解決的瓶頸問題。本項目研製了具有自主智慧財產權的高通量單細胞分離鑑定一體化微流控晶片。依據流體動力學設計了2048（低）、4096（中）、16384（高）個微反應腔室的三種集成度的腫瘤幹細胞單細胞RT-PCR微流控晶片，建立單細胞在微通道中實現單分散所需流速，細胞進樣量，裂解參數等物理條件；設計了自吸式進樣的微流控晶片，將單細胞分隔到成千上萬個不同的微反應室，實現高通量單細胞快速分離；隨即將分隔在獨立微反應腔室的單細胞直接進行PCR擴增，然後採用螢光成像檢測，實現了腫瘤幹細胞鑑定；建立了簡便的基於微流控晶片的腫瘤幹細胞單細胞分離與PCR擴增鑑定的新方法，解決腫瘤幹細胞特異性鑑定困難的問題。實驗室建立肺癌細胞株腫瘤幹細胞富集懸浮培養的方法，利用已知的腫瘤幹細胞標誌物進行單細胞鑑定，與現有的腫瘤幹細胞常規鑑定技術-流式細胞術的實驗結果進行比較，考察了研究的微流控晶片方法具有很高的可靠性，穩定性。對腫瘤幹細胞自我更新和腫瘤分化相關的多種信號分子進行了研究，並檢測了抗癌藥物紫杉醇對腫瘤幹細胞的殺傷作用。所研製的微流控晶片易於操作、敏感度高（單細胞）、準確性好（可計數）、試劑節省（數微升/片），適合於任何實驗室進行腫瘤幹細胞等稀少細胞的快速鑑定。本項目為腫瘤幹細胞的研究提供一種單細胞分離與特異性鑑定的新工具，用於鑑定腫瘤幹細胞的分子遺傳特徵和特異標誌物，為腫瘤學研究提供科學依據，為臨床病情判斷、病程監控，指導治療等奠定基礎.
