《單細胞數字PCR技術用於肺癌循環腫瘤細胞的鑑定分析》是依託浙江大學，由姚波擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：單細胞數字PCR技術用於肺癌循環腫瘤細胞的鑑定分析
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：姚波
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肺癌是常見的惡性腫瘤之一，現有的診斷技術難以達到早期診斷的目的，是該疾病的死亡率居高不下的重要原因。鑒於此，我們提出一種以循環腫瘤細胞（CTC）為研究對象的單細胞數字PCR基因分析技術。該技術從分子生物學角度出發，結合微流控晶片的技術優勢，在單細胞水平研究腫瘤細胞的基因表達、突變情況以及CTC的異質性。該課題主要包括三部分工作，首先採用梯度離心、免疫分離和免疫螢光技術從血液樣本中分離富集CTC。接著藉助螢光成像技術尋找免疫螢光標記陽性的CTC以及不具有癌症標記物抗原的CTC。通過毛細管顯微操作技術將單細胞逐個取出。最後，採用數字PCR技術對單細胞內腫瘤基因的表達水平和突變情況進行分析。本項目提出以血液中的CTC為研究對象，相對於直接對血液樣本進行分析更加準確可靠，本項目的成果將有助於提高微創檢測技術用於模癌症篩研究的準確性和實用性，為肺癌早期診斷和個體化治療提供新的技術平台和重要信息。
結題摘要
目前圍繞腫瘤幹細胞基因分析展開的一系列研究工作已成為包括生命科學、生物醫學、藥物學等諸多領域關注的焦點。我們開發了一種基於微流控技術的液滴陣列晶片用於單細胞RT-qPCR檢測和基因表達分析。該系統可以生成納升甚至皮升級液滴陣列，並將細胞懸液、試劑等分步加入到每個液滴中，分別完成細胞包封、裂解、反轉錄和PCR擴增步驟。利用該系統，我們五分鐘內生成了100個2nL體積的液滴陣列，並且實現了單個Huh-7細胞中mir-122表達分析。本項工作的意義在於建立了一種簡單易用、可操縱性強的單細胞分析平台，與文獻報導的其他單細胞分析技術不同的是，該系統生成的液滴是半封閉的體系，可以設計程式向反應體系中加入試劑或終止反應進行，操作靈活，適合用於多種分析體系，是一種通用的單細胞分析平台。
