《生長抑素經NHE途徑調節腸道水、鈉吸收》是依託四川大學，由王春暉擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：生長抑素經NHE途徑調節腸道水、鈉吸收
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王春暉
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們小組前期研究發現，生長抑素（SST）及其類似物能促進腸上皮細胞株（Caco-2）及小鼠小腸刷狀緣上皮(BBM)鈉/氫交換體(NHE8)表達。推測SST可通過影響NHE的功能，調節小腸鈉、水吸收。我們擬建立小鼠感染性腹瀉模型、NHE3及NHE3/NHE2基因敲除（Knockout, Ko）小鼠模型，檢測小鼠小腸黏膜SST含量變化及受體表達情況；給予生長抑素類似作用後，觀察模型小鼠水、鈉吸收、體重變化及腹瀉轉歸，測定小腸刷狀緣上皮NHE8和/或NHE3表達。原代分離小腸黏膜上皮細胞及傳代培養Caco-2細胞，給予不同濃度的SST作用後，檢測細胞鈉/氫交換活性、NHE8及NHE3蛋白及RNA表達變化。採用不同的信號分子抑制劑干預，探討SST調節NHE基因表達可能的信號傳導通路。本研究不僅有助於從新的視角認識小腸水、鈉吸收的調節機制，也有助於為SST類似物治療腸道水、鹽吸收障礙提供科學依據。
結題摘要
腹瀉發生機制與腸道分泌和吸收功能失衡有關，鈉/氫交換體（NHE）在腸道水鈉吸收中發揮重要作用。生長抑素具有治療腹瀉及促進腸道水鈉吸收的作用，作用機制尚不清楚。本課題探討了生長抑素對生理情況下NHE8表達及功能的影響；生長抑素對腹瀉小鼠模型腹瀉症狀的改善作用及NHE8表達的影響；生長抑素調節NHE8表達的機制及信號傳導通路。此外，探討了生長抑素對於腹瀉小鼠腸道緊密連線蛋白表達的影響。研究發現：1. 生長抑素類似物奧曲肽能刺激生理狀態下小鼠小腸NHE8蛋白的表達；不影響NHE3蛋白表達。2.體外實驗表明，SST 能明顯促進Caco-2 細胞NHE8 總蛋白水平表達；SST 能刺激Caco-2 細胞膜蛋白NHE8 表達；生長抑素刺激Caco-2腸上皮細胞NHE8表達呈濃度及時間依賴性。3. 生長抑素能上調NHE8活性，促進鈉離子吸收。4. 腹瀉小鼠生長抑素水平及NHE8表達水平均較對照組明顯下降；給予生長抑素干預後，小鼠腹瀉情況明顯改善，其近端結腸及遠端結腸NHE8表達水平明顯上升。5. EPEC和TNF-α作用於Caco-2細胞後，NHE8蛋白表達量較對照組降低，生長抑素作用後，NHE8蛋白表達在兩模型組均明顯增加。6. RT-PCR 分析發現，小鼠小腸上皮表達SSTRSSTR1、SSTR2、SSTR4、SSTR5，人Caco-2 細胞表達SSTR1、SSTR2、SSTR3及SSTR5。SSTR2激動劑Seglitide能促進Caco-2 細胞表達NHE8，SSTR2拮抗劑CYN154806 能分別阻斷Seglitide及SST對NHE8 表達的促進作用。進一步分析表明，生長抑素經促進p38MAPK磷酸化上調NHE8表達。7. CR感染小鼠結腸claudin-1蛋白及Claudin-3蛋白表達均較對照組降低；奧曲肽作用後兩種蛋白表達水平均明顯升高。8. DSS小鼠結腸occludin蛋白及Claudin-3蛋白表達均較對照組下調；奧曲肽作用後Claudin-3蛋白升高，而occludin蛋白無變化。9. EPEC抑制Caco-2細胞claudin-1及claudin-3蛋白表達，生長抑素作用後，兩種蛋白表達水平均較對照組增加。TNF-α抑制Caco-2細胞claudin-3蛋白表達而不影響claudin-1蛋白表達，生長抑素作用後claudin-3蛋白表達水平增加。
