基本介紹
- 中文名：生物活素
- 外文名：bios
- 作用於：對酵母菌增殖
- 類型：微量物質類
- 含有：肌醇
- 拼音：shēng wù huó sù
簡介,研製,殺菌效果,
簡介
研製
(1)將粗製的海藻酸聚多糖、海洋甲殼胺活素按比例用生物技術進行45℃加溫、溶解、提純。
(2)將海洋生物複合酶用提純的具有活性的生物液進行吸附包被。按比例溶解於純淨水中加熱54℃ ,再進行磁力攪拌、乳化反應,再按比例純化水中進行冷卻。
菌片的製備 試驗菌為金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231)。用磷酸鹽緩衝液(PBS)將其24 h新鮮培養物洗下,製成菌懸液,染於脫脂的無菌布片(1 cm× 1 cm)上,乾燥,製成含菌量為5× 105～ 106 cfu/片的菌片。
中和劑鑑定試驗 試驗指示菌為金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。試驗設平行8組。結果判定,以第1組不長菌或有少量菌生長且少於第2組,第2組菌數> 50 cfu/ml;第3、4、5組間菌數相差不超過15%且在規定範圍;第6、7、8組不長菌;試驗重複3次結果一致,表明所選中和劑及濃度適宜。
載體浸泡定量殺菌試驗 按每片5.0 ml的量,吸取相應濃度的生物活素注入無菌平皿中。置(20± 1)℃水浴箱內5 min後,分別放入預先製備的菌片3片。作用至預定時間,取出菌片,分別移入到盛有5.0 ml中和劑溶液的試管中振敲混勻試管80次,取1.0 ml接種無菌平皿,傾注普通營養瓊脂培養基(白色念珠菌用沙堡葡萄糖瓊脂),於37℃溫箱培養48 h計數平板菌落數,試驗重複3次(包括對照);計算平均殺滅率。判定結果以平均殺滅率大於99.90%為消毒合格。
穩定性試驗 將裝有1 000 ml該消毒劑的原裝玻璃瓶兩支(瓶口蓋以膠塞後外加塑膠膜密封)置54 ℃溫箱14d、37℃溫箱90 d。於放置前、後,分別取樣檢測對金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的殺滅效果。作用時間分組及其他試驗條件均與原載體浸泡定量殺菌試驗相同。儲存後樣品增加10%的濃度,對微生物的殺滅效果仍能達到消毒的要求,可判為通過。
金屬腐蝕性試驗 金屬片為圓形直徑24.0 mm,厚1.0 mm,穿一直徑為2.0 mm小孔,表面積總值約為9.80cm2,光潔度為6。銅、鋁片、碳鋼、不鏽鋼,用清潔洗滌劑浸泡,去油,洗淨;以120號粒度水砂紙磨去金屬表面的氧化層,再用自來水沖淨。測量片的直徑、厚度、孔徑(精確至0.1 mm)。用無水丙酮再次脫脂。置50 ℃恆溫箱中乾燥1 h後將處理後的金屬片放天平內稱重,為試驗前重量。分別(每種3片)掛在4個燒杯600 ml最高使用濃度消毒液中浸泡72 h,浸泡規定時間後取出金屬片除去腐蝕產物並清洗後,用粗濾紙吸乾水分,乾燥1 h後分別在天平上稱重。作為試驗後重量。同時做對照。計算腐蝕速率和腐蝕度。
影響因素試驗 有機物對殺菌效果的影響試驗:干擾物為小牛血清,設定對照組;含25%小牛血清組;含50%小牛血清組等3組。各組所用海洋生物活素消毒液濃度和作用時間,同殺菌試驗。
毒性試驗
急性經口毒性試驗 選體重為20～ 22 g的昆明種一級小鼠20隻,雌、雄各半,一次經口灌胃試驗劑量藥液後觀察14 d,記錄小鼠各種症狀和死亡情況。
蓄積毒性試驗 取體重為180～ 200 g的昆明種一級大鼠20隻,雌、雄各半。按體重計算染毒劑量,第1～ 4 d染毒劑量為0.1 LD50,以後每4 h遞增1.5倍劑量,直至28 d。每4 h稱重1次。
急性眼刺激試驗 用健康白色家兔4隻,體重2.5～ 3.0 kg,將該劑原液0.1 ml滴入家兔左眼結膜囊內,被動閉合4 s後用生理鹽水沖洗,右眼為對照。於滴眼後6、24、48、72 h和4、7 d觀察並記錄眼局部刺激反應。
急性皮膚刺激試驗 取4隻健康白色家兔,體重2.5～ 3.0 kg,將背部脊柱兩側毛分別3.0 cm× 3.0 cm,不損傷表皮。將0.2 ml該劑原液均勻塗抹在左側皮膚上,用二層紗布和玻璃紙覆蓋後固定。右側皮膚作為空白對照。於除去受試物後1、24、48 h分別觀察皮膚反應。
小鼠骨髓細胞微核試驗 選用50隻健康小鼠,隨機分為5組,每組雌、雄各5隻,共設3個劑量組,劑量設計分別為1/2LD50、1/5LD50、1/20LD50mg/kg體重,另設陰性對照及陽性對照,陽性組給予環磷醯胺40 mg/kgBW。受試物及陽性物均經口灌胃,採用30 h給藥法,即兩次給藥間隔24 h,於末次給藥後6 h,常規取股骨骨髓製片、固定、染色,於油鏡下對每隻動物觀察1 000個嗜多染紅細胞,計算微核率,進行統計學分析。
小鼠精子畸形試驗 選用25隻雄性健康小鼠,隨機分為5組,每組各5隻,共設3個劑量組,劑量設計分別為1/2、1/5、1/20LD50,另設陰性對照及陽性對照,陽性組給予環磷醯胺40 mg/kgBW。陰性對照為蒸餾水。受試物、陰性對照物及陽性物均經口灌胃,連續5 d,於首次給藥後的第35 d處死動物,取副睪製片、固定、染色,於油鏡下對每隻動物計數2 000條精子,計算精子畸形發生率,進行統計學分析。
殺菌效果
中和劑試驗結果
試驗表明,用金黃色葡萄球菌、白色念珠菌試驗,慈華牌海洋生物活素300 mg/ L稀釋液用含40 g/ L吐溫- 80+ 20 g/ L卵磷脂+ 10 g/ L甘氨酸※PBS緩衝液,可有效中和試驗濃度的海洋生物活素消毒液殘餘作用,結果符合規定要求。
殺菌結果
結果表明,在19～ 21 ℃條件下,以含體積分數300 mg/ L海洋生物活素溶液作用2 min,對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌平均殺滅率為99.99%;作用5 min,對白色念珠菌作用殺滅率均達99.99%,見表1。
穩定性
試驗表明,慈華牌海洋生物活素在54 ℃下放置14 d, 37℃、相對濕度80%放置90 d有效成分下降率為6.12%,殺菌效果無明顯影響,見表2。
金屬腐蝕性
經72 h生物活素金屬腐蝕性試驗結果,對不鏽鋼、銅無腐蝕性,對碳、鋼、鋁基本無腐蝕性。
影響因素試驗
有機物對殺菌效果的影響試驗:染布片菌懸液中含體積分數50%小牛血清對該劑殺菌效果無明顯影響。
毒性
在急性經口毒性試驗中,小鼠染毒後未見異常反應外。未出現死亡,表明該劑原液對雌、雄小鼠急性經口LD50> 5 000 mg/kg。按化學物質急性毒性分級標準屬實際無毒性。蓄積毒性試驗給藥20 d,雌、雄小鼠均無死亡情況發生,小鼠蓄積係數K> 5,按蓄積毒性分級標準為弱蓄積毒性。家兔皮膚刺激試驗,該劑原液對皮膚刺激反應積分均值為0。按“皮膚刺激強度分級”標準屬無刺激性。家兔急性眼刺激試驗,該劑原液滴眼4 s後沖洗,對動物急性眼刺激積分指數為3,按“眼刺激強度評價標準”對眼無刺激性。小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗為應陰性,無致突變性。精子畸形試驗結果為陰性。
