瑞氏染色是目前最常用而又最簡單的染色方法。瑞氏試劑中之酸性伊紅和鹼性美藍混合經化學作用後，變成中性之 伊紅化美藍，久置後，經氧化而含有天青。此三種染料分別和細胞核及漿中的NH3+和COO-等結合，使細胞核及胞漿著色。由於系中性染料，又有緩衝液調節酸鹼度，所以細胞受染後，藍紅等顏色都較適中，核染質、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。
基本介紹
- 中文名：瑞氏染色
- 外文名：Wright ' s stain
- 又稱：美藍－伊紅Y
- 本質：染色劑
理化原理,染液配製,溶劑,緩衝液,
理化原理
瑞氏染料是由鹼性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍 染料即瑞氏 （美藍－伊紅Y）染料。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是鹼性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。
染液配製
溶劑
用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。 在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多餘 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由於甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。
瑞氏染液配製：
瑞氏染料 830mg 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱乾燥瑞氏染料（事先放入溫箱乾燥過夜）放置乳缽內， 用乳棒輕輕敲染料成粉末狀，再研磨至細粉末狀（聽不到研芝麻聲）。加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤而無染料粉粒沉著後，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮。靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止。染料完全轉移至儲存瓶後，搖勻，密封瓶口，室溫下避光保存，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
緩衝液
1) 緩衝液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩衝液中酸基中和，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基中和，使 pH 穩定。
2) 緩衝液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌污染，如有污染則應報廢。
