《猴B病毒包膜蛋白gD與細胞受體分子nectin-1的相互作用機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由袁菊芳擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：猴B病毒包膜蛋白gD與細胞受體分子nectin-1的相互作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：袁菊芳
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
B病毒在自然宿主（猴群）中的感染率＞60%，感染動物無明顯臨床症狀並終生帶毒，人感染後的死亡率＞70%，是重要的動物源性傳染病。.我們前期發現，只有針對B病毒gD的抗體能阻止病毒感染；抗nectin-1抗體部分影響Vero細胞感染，完全阻斷表達nectin-1的CHO-K1細胞感染，表明gD與nectin-1相互作用是B病毒感染的關鍵環節。鑒於B病毒與單皰病毒高度同源，推測其入侵機制相似，即病毒與受體互作包括膜結合、分子變構、膜融合等過程。本項目以噬菌體展示技術為基礎，輔以生物信息學和同源病毒研究結果，篩選gD和nectin-1互作的功能域；構建功能域突變體，製備突變體及突變體轉染細胞；最後，重組突變體及轉染細胞與表達野生型互作蛋白的靶細胞作用，通過ELISA、細胞融合、病毒感染等實驗，揭示兩個互作分子的功能域及各功能域的作用。本課題旨在闡明B病毒感染的分子機制，為防治措施選擇提供新靶點。
結題摘要
B病毒是以猴為自然宿主且對人高度致死的皰疹病毒屬成員，在猴群中的感染率約為60%，人感染後的死亡率超過75%。當前，由於缺乏特異性治療手段，淨化實驗猴群、探索B病毒感染機制是疾病防控的主要研究方向。本課題構建了穩定表達B病毒膜蛋白gD、gB和gB+gD的工程細胞，血清學評價顯示，細胞表達產物的敏感性顯著高於大腸表達產物，聯合使用gD和gB重組蛋白的準確性高於單個分子。進而，通過ELISA參數最佳化，成功研製了B病毒ELISA抗體檢測試劑盒；與國外金標準試劑盒相比，新試劑盒的準確性為98.28%~98.95%，且具有安全、低廉、反差明顯等優點。此外，克隆表達了猴nectin-1基因，構建了穩定表達猴nectin-1的CHO-K1工程細胞，感染實驗表明，HSV-1、HSV-2和PRV在nectin-CHO-K1工程細胞上實現了病毒增殖，說明nectin-1是這些皰疹病毒的特異性受體，但其功能不是增加病毒結合，而是參與病毒侵入過程。細胞融合實驗發現，發生細胞融合至少需要4種B病毒膜蛋白（gB、gD、gH、gL）以及細胞受體nectin-1共同參與，gD分子上的53TDPPDVRRVY62、239VDGIGMLPRFIPENQRIVAVY259和nectin-1分子的59SVKITQVTWQ69、78KQNVAIYNPSMGVSVL93、127EFATFPTGN136都是影響膜融合的重要功能區，這些部位缺失將導致細胞融合消失；但gD重組蛋白不與nectin-CHO-K1細胞結合，nectin-1的三個功能區肽段也不與gD重組蛋白結合，說明二者之間並不存在強烈的相互作用。我國實驗靈長類動物的生產和出口占全球50%以上，本課題研製的猴B病毒血清抗體ELISA檢測試劑盒如果申報成功（正在申報），不僅能顯著降低實驗靈長類動物產業界的生產成本，也為高品質實驗靈長類動物（如SPF）培育提供了技術支撐。
